產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌重組沙門氏菌基因工程疫苗的研究.pdf

1、豬進(jìn)行性萎縮性鼻炎(Swineprogressiveatrophicrhinitis，PAR)，主要是由D型產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(toxigenicPasteurellamultocida,T+Pm)引起的豬的呼吸道疾病，該病給養(yǎng)豬業(yè)造成較大經(jīng)濟(jì)損失。
　　 疫苗免疫是預(yù)防該病的主要手段，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，新型的基因工程疫苗被廣泛用于動(dòng)物傳染病的預(yù)防。本研究以徐引弟博士構(gòu)建的沙門氏菌缺失株C501為載體，將產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿

2、菌toxA基因C端免疫原性片段通過構(gòu)建重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化C501，獲得產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌重組沙門氏菌基因工程疫苗菌株。主要研究內(nèi)容如下：
　　 1.重組菌株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究參照產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌toxA基因序列(NO.AY864768)，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增toxA基因C端，構(gòu)建無抗性原核表達(dá)質(zhì)粒pYA-toxAc，并電轉(zhuǎn)沙門氏菌C501，獲得重組菌株C501(pYA-toxAc)。該重組菌株可以穩(wěn)定遺傳表達(dá)外源基因片段，且表

3、達(dá)產(chǎn)物不影響沙門氏菌自身生長特性、表型及生化特性；重組菌株毒力較親本株C500下降約2倍左右。
　　 2.重組菌株對小鼠的免疫保護(hù)效力研究將重組菌株C501(pYA-toxAc)分別通過口服和皮下注射兩種方式免疫小鼠，間隔14天加強(qiáng)免疫一次，第28天分別用豬霍亂沙門氏菌C78-1株10×LD50口服攻毒和產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌HN-13株5×LD50腹腔攻毒。試驗(yàn)結(jié)果表明，皮下免疫重組菌可以刺激小鼠產(chǎn)生針對沙門氏菌和toxAc較高

4、的IgG抗體和較低的IgA抗體；口服免疫獲得較高的IgA抗體，而IgG抗體較低。無論口服或皮下免疫小鼠均可以對豬霍亂沙門氏菌的攻擊提供100％保護(hù)，皮下方式免疫小鼠對產(chǎn)毒巴氏桿菌的攻擊為80％的保護(hù)，口服組為60％的保護(hù)，對照組80％死亡。
　　 3.重組菌株對豬的免疫試驗(yàn)選取10頭產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌與沙門氏菌血清學(xué)和病原學(xué)均為陰性的斷奶仔豬，隨機(jī)分為2組，每組5頭。以3×109CFU/頭的劑量頸部肌肉注射免疫，間隔14天進(jìn)行