禽多殺性巴氏桿菌OMPs、LPS和滅活疫苗的制備與免疫.pdf

1、本文研究了禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白（OMPs）和脂多糖（LPS）的提取和純化以及禽多殺性巴氏桿菌的滅活，在此基礎(chǔ)上研制出了禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白疫苗、脂多糖疫苗和滅活疫苗，并進(jìn)行了免疫保護(hù)試驗(yàn)。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、挪捎萌芫阜?、液氮研磨法和超聲波法提取禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白，考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白濃度，之后進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，用凝膠分析軟件Quantity One分析電泳條帶。結(jié)果顯示，溶菌酶法、液

2、氮研磨法和超聲波法三種方法所提外膜蛋白溶液的蛋白濃度分別為242μg/mL、1013μg/mL和1770μg/mL。通過電泳分析，三種方法提取的 OMPs圖譜大致相同，每個泳道都含有28.7kD、35.6kD和40.3kD三條主要的蛋白多肽，其中35.6kD的蛋白含量最多。
　?、撇捎脽岱铀ê捅椒?氯仿/石油醚法（PCP法）提取禽多殺性巴氏桿菌脂多糖，苯酚-硫酸法測定所提脂多糖溶液中多糖含量，考馬斯亮藍(lán)G-250法測其中蛋白含量

3、。結(jié)果顯示，熱酚水法所提溶液中脂多糖濃度為2056μg/mL，PCP法為681μg/mL，但熱酚水法提取的LPS溶液中蛋白濃度為31μg/mL，是多糖含量的1.5％， PCP法提取的LPS溶液中蛋白濃度為9μg/mL，為多糖含量的1.3%。
　?、茄芯壳荻鄽⑿园褪蠗U菌滅活時最佳甲醛含量，并將滅活菌液與弗氏完全佐劑混合制備出禽多殺性巴氏桿菌油乳劑滅活疫苗。結(jié)果表明，當(dāng)甲醛含量為0.2%，37℃作用2 h后，可殺死全部巴氏桿菌，所制備

4、的油乳劑滅活疫苗黏度、穩(wěn)定性和安全性均符合要求。
　?、戎苽涑銮荻鄽⑿园褪蠗U菌OMPs疫苗、LPS疫苗和滅活疫苗，進(jìn)行動物免疫，小白鼠分為五組：OMPs組、LPS組、滅活疫苗組、禽多殺性巴氏桿菌病弱毒活疫苗組和 PBS對照組，每組16只。各組均免疫三次，每次間隔兩周。間接 ELISA檢測免疫后小白鼠血清特異性抗體水平，MTT法檢測小白鼠脾淋巴細(xì)胞增殖情況。強(qiáng)毒攻擊，計算小白鼠死亡數(shù)及保護(hù)率。動物免疫后，OMPs組、LPS組和滅活疫