豬用復(fù)合益生菌制劑的研制與應(yīng)用.pdf

1、本研究旨在篩選出能與實驗室前期篩得的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)YB-DY-1和釀酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）P-1形成良好協(xié)同作用的乳酸菌，以期研制出高效豬用復(fù)合益生菌制劑。內(nèi)容包括益生乳酸菌篩選，復(fù)合益生菌制劑的研制及其飼喂生長豬、妊娠母豬與斷奶仔豬的效果評價，具體為以下4部分。
　　1.豬源益生乳酸菌的篩選、分離及鑒定。為獲得高效的豬源益生乳酸菌，采集健康豬腸道

2、組織，沖洗腸道表面內(nèi)容物，從腸道黏膜中分離、純化出乳酸菌，經(jīng)過體外耐膽鹽、耐酸、抑制病原菌和安全性評價試驗，篩選出性能優(yōu)良的益生菌株，并進行分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果從分離純化出的44個菌株中，成功篩選到一株源自回腸的高效菌株RS-018，其耐受0.3％豬膽鹽和pH2.5的存活率分別為86.21％和85.06％，對大腸桿菌K88、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別為21.64mm、13.01mm和16.29mm，16S rDNA序列長度

3、為1490bp，鑒定為羅伊氏乳桿菌（Lactobacillus reuteri），且對小鼠的安全性無異常。結(jié)果提示，篩得的羅伊氏乳桿菌RS-018可作為研制豬用益生菌制劑的備用菌株。
　　2.復(fù)合益生菌制劑的研制。為研制出活菌數(shù)較高的豬用復(fù)合益生菌制劑。將篩得的羅伊氏乳桿菌RS-018與地衣芽孢桿菌YB-DY-1和釀酒酵母菌P-1復(fù)合制成益生菌制劑，以總活菌數(shù)為優(yōu)選指標(biāo)，優(yōu)化三菌液態(tài)發(fā)酵共培養(yǎng)工藝及固態(tài)發(fā)酵（Solid-state

4、 fermentation，SSF）工藝，并采用冷凍干燥法和烘干法優(yōu)化益生菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的干燥工藝。結(jié)果表明，三菌液態(tài)共培養(yǎng)的最佳工藝為:先同時接種1％RS-018和1％P-1種子液，35℃靜置培養(yǎng)12h后，再接種5％YB-DY-1種子液，37℃，150r/min，震蕩培養(yǎng)24h，在此條件下發(fā)酵液中三菌活菌總數(shù)可達(dá)1.24×109cfu/ml，且每種菌的活菌數(shù)均＞108cfu/ml;固態(tài)發(fā)酵最佳發(fā)酵條件為:混菌種子液接種量5％，基質(zhì)初始

5、水分60％，發(fā)酵溫度36℃，發(fā)酵36h，在此條件下，發(fā)酵產(chǎn)物中的活菌總數(shù)可達(dá)1.12×1010cfu/g，且每種菌的活菌數(shù)均＞109cfu/g;最佳干燥方法為冷凍干燥法，干燥后的復(fù)合菌劑總活菌數(shù)可達(dá)6.23×109cfu/g，且每種菌的活菌數(shù)均＞3×108cfu/g。結(jié)果提示，該復(fù)合益生菌制劑滿足了飼用益生菌制劑的基本要求，可進一步用于豬的飼養(yǎng)試驗，以確定其飼用效果。
　　3.飼喂益生菌制劑對生長豬生長性能、血清生化及免疫指標(biāo)的影

6、響。為評價研制的復(fù)合益生菌劑對生長豬的飼喂效果。采用單因素4水平3重復(fù)隨機設(shè)計，將體重16.07±1.02kg的健康二元豬（大×長）母豬72頭，隨機分為4個組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)6頭豬。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，其它3個組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1％、0.2％和0.3％的復(fù)合益生菌制劑，試驗期35天，于試驗結(jié)束當(dāng)天，以重復(fù)為單位，稱各組豬的體質(zhì)量并記錄采食量以計算其生長性能，并在每個重復(fù)中隨機選取2頭豬，采血，用于檢測血清生化及免疫指標(biāo)。

7、結(jié)果表明，隨著益生菌添加劑量的增加，豬的平均日增重(average daily gain，ADG)及平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)也不斷提高，當(dāng)添加劑量為0.3％時，豬的ADG和ADFI顯著高于對照組（P＜0.05）;飼喂益生菌制劑0.2％和0.3％組的血清白蛋白(albumin，ALB)顯著(P＜0.05)高于對照組，且以0.3％組的ALB含量最高，而各組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine

8、aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase，AST)、總蛋白(total protein，TP)、球蛋白(globulin，GLB)和尿素氮(urea nitrogen，BUN)均差異不顯著(P＞0.05);各組血清免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)差異不顯著（P＞0.05），但隨著益生菌劑飼喂劑量的增加，血清免疫球蛋白A(immunoglobulin A，

9、IgA)和血清免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）不斷提升，其中，0.3％組豬的IgA和IgG均顯著高于(P＜0.05)對照組。結(jié)果提示，該復(fù)合益生菌劑能夠提高生長豬的采食量進而提高其日增重，同時可改善其免疫性能，且以0.3％的添加劑量飼喂效果最佳。
　　4.飼喂益生菌制劑對妊娠母豬生產(chǎn)性能及其仔豬生長性能的影響。為評價研制的復(fù)合益生菌劑對妊娠母豬和斷奶仔豬的飼喂效果，采用單因素4水平6重復(fù)隨機設(shè)計，將同胎次、

10、妊娠期81～85天的健康母豬24頭，隨機分為4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)為1頭豬，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，其它3個組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1％、0.2％、0.3％的復(fù)合益生菌制劑。以窩為單位，于母豬分娩時，稱仔豬的出生重并記錄出生產(chǎn)仔數(shù)及出生活仔數(shù)，于仔豬28日齡斷奶時，稱哺乳仔豬的斷奶重，記錄斷奶活仔數(shù)、斷奶存活率并統(tǒng)計其哺乳腹瀉率，然后在每窩隨機選取1頭豬，采血，用以免疫指標(biāo)的測定;隨后母豬離開仔豬，留圈的24窩斷奶仔豬（共227頭）

11、改飼斷奶仔豬飼糧，并添加與其母豬等劑量的復(fù)合益生菌制劑28天。試驗結(jié)束后，統(tǒng)計其腹瀉率，并以窩為單位，稱其體質(zhì)量并記錄采食量。結(jié)果表明，各組總產(chǎn)仔數(shù)、出生活仔數(shù)、出生活仔率、出生窩均重合出生頭均重差異均不顯著(P＞0.05);各組哺乳仔豬的斷奶活仔數(shù)、斷奶存活率、斷奶體重、血清IgM及哺乳期間腹瀉率差異均不顯著(P＞0.05)，但其IgA和IgG隨益生菌制劑添加劑量的增加而增加，其中，0.2％組豬的IgA顯著高于對照組（P＜0.05），

12、而0.3％組豬的IgA和IgG均顯著高于對照組(P＜0.05);隨益生菌飼喂添加劑量的增加，斷奶仔豬的ADG和ADFI呈增高趨勢，其料重比(feed/gain，F(xiàn)/D)和腹瀉率呈降低趨勢，當(dāng)飼喂劑量達(dá)到0.2％及以上時，其ADG和ADFI顯著高于對照組(P＜0.05)，腹瀉率顯著低于對照組(P＜0.05)。當(dāng)飼喂劑量為0.3％時，其料肉比也顯著低于對照組(P＜0.05)。結(jié)果提示，飼喂復(fù)合益生菌劑不影響妊娠母豬的生產(chǎn)性能，但可提高其哺乳