飼用納豆芽孢桿菌微生態(tài)制劑的研制與開(kāi)發(fā).pdf

1、納豆屬功能食品，納豆菌是農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的可用于飼料的微生物菌種之一。本文進(jìn)行了納豆菌的分離鑒定、篩選；研究了以豆粕為主要原料，生產(chǎn)納豆菌飼用微生態(tài)制劑的生產(chǎn)工藝，并進(jìn)行了發(fā)酵產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)和功能評(píng)價(jià)；在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了中試及中試產(chǎn)品的動(dòng)物喂養(yǎng)試驗(yàn)，得到以下結(jié)果： (1)菌株分離和分子鑒定。共分離了7個(gè)菌株，對(duì)其中4個(gè)菌株natto1，3，4，6和標(biāo)準(zhǔn)菌株natto0做16SrDNA測(cè)序，結(jié)果表明所測(cè)菌株與GenBank報(bào)道的納豆芽孢桿菌B

2、acillussubtilissubsp.Natto(AY608741)16SrDNA同源性達(dá)到99％，表明屬納豆芽孢桿菌。 (2)菌株篩選。通過(guò)菌株對(duì)溫度、pH和通氣的耐受性進(jìn)行篩選。結(jié)果顯示不同菌株間耐熱、耐酸、耐缺氧差異顯著，其中菌株4綜合性能最佳，適合作為生產(chǎn)菌株。通過(guò)對(duì)納豆菌生存性能觀察，發(fā)現(xiàn)該菌對(duì)膽鹽有較強(qiáng)的耐受性，對(duì)青霉素敏感，且對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有抑制作用。 (3)固體發(fā)酵和干燥工藝。固體發(fā)酵生

3、長(zhǎng)曲線圖表明發(fā)酵16h時(shí)納豆菌數(shù)達(dá)到高峰。工藝優(yōu)化結(jié)果表明，當(dāng)豆粕含水量60％，浸泡水pH6.5，添加NaCl0.30％，葡萄糖5％，明膠5％時(shí)較適合納豆菌生長(zhǎng)；發(fā)酵豆粕與玉米粉的適宜配比為1∶1；產(chǎn)品在65℃以下,60min以?xún)?nèi)干燥活菌數(shù)變化不顯著，75℃以上的高溫處理會(huì)導(dǎo)致活菌數(shù)顯著下降。 (4)豆粕發(fā)酵過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)功能成分變化分析。結(jié)果表明，發(fā)酵后酸性蛋白酶酶活和肽的含量提高，其中酸性蛋白酶酶活在發(fā)酵12h時(shí)含量達(dá)到最高，肽

4、含量在發(fā)酵14～16h時(shí)達(dá)到最高。發(fā)酵后蛋白質(zhì)含量有所下降。經(jīng)過(guò)16h發(fā)酵，部分蛋白質(zhì)降解，使培養(yǎng)基中增加了分子量介于2561～4000的肽類(lèi)，絕大部分肽的分子量由發(fā)酵前的1100降低至800以下。 (5)產(chǎn)品的中試、營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)和動(dòng)物試驗(yàn)。按照優(yōu)化得到的生產(chǎn)工藝進(jìn)行了中試，中試產(chǎn)品的納豆菌含量為7.5×108cfu/g，高于農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)(1×108cfu/g)。與發(fā)酵前相比，產(chǎn)品的肽、VB2和吡啶二羧酸的含量均有大幅度提高。飼料中添