豬PID1基因的克隆、表達(dá)及其與肌內(nèi)脂肪沉積關(guān)系的研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高，豬肉品質(zhì)已引起了消費(fèi)者和生產(chǎn)者的廣泛重視。遺傳基礎(chǔ)是改善肉品質(zhì)的關(guān)鍵。肌內(nèi)脂肪（IMF）的含量是衡量豬肉品質(zhì)的一個(gè)重要的指標(biāo)，它對(duì)肉的嫩度、多汁性和風(fēng)味有明顯的正效應(yīng)，目前關(guān)于調(diào)控豬肌內(nèi)脂肪沉積的機(jī)理還不清楚，主效基因還沒有確定。本研究以遺傳背景有較大差異的萊蕪豬、培育品種魯萊黑豬、引入品種大白豬為研究對(duì)象，對(duì)豬磷酸酪氨酸互作結(jié)構(gòu)域1（phosphotyrosine interactiondomain conta

2、ining1，PID1）基因進(jìn)行了克隆表達(dá)分析，旨在為肉質(zhì)改良的MAS育種篩選有效的分子標(biāo)記提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　 以萊蕪豬為研究對(duì)象，利用兼并引物進(jìn)行RT-PCR從萊蕪豬脂肪和肌肉組織中克隆PID1基因CDS區(qū)全序列（已提交NCBI，登錄號(hào)：GU1396255），并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明：PID1基因CDS區(qū)全長(zhǎng)654 bp，編碼含217個(gè)氨基酸的蛋白，其定位在細(xì)胞質(zhì)，分子量為54kDa，等電點(diǎn)為5.11

3、，蛋白功能預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，PID1的C端有-PTB（磷酸酪氨酸作用位點(diǎn)）結(jié)構(gòu)域，與IRS1、SHC中PTB結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)相似，提示可能有相似的功能，在糖和脂肪代謝中發(fā)揮重要作用。
　　 以萊蕪豬為研究對(duì)象，應(yīng)用QRT-PCR技術(shù)研究PID1基因在萊蕪豬10個(gè)不同組織（心臟、背最長(zhǎng)肌、脾臟、肝臟、肺臟、小腸、大腸、腦、脂肪、脊髓）的表達(dá)譜信息。結(jié)果表明：PID1基因在大多數(shù)組織中均有表達(dá)，其在各組織中的mRNA表達(dá)豐度表現(xiàn)為：心臟>腦>肝

4、臟>脂肪>背最長(zhǎng)肌>肺臟>脊髓>大腸>脾臟，而在小腸中未見明顯表達(dá)，推測(cè)PID1基因在萊蕪豬的生長(zhǎng)過程中起到廣泛的生物學(xué)作用，提示它調(diào)節(jié)目的基因轉(zhuǎn)錄具有廣泛性。
　　 運(yùn)用QRT-PCR技術(shù)，研究PID1基因在萊蕪豬、魯萊黑豬、大白豬三個(gè)豬種的脂肪、背最長(zhǎng)肌和肝臟組織中的mRNA表達(dá)差異及其與IMF相關(guān)性，結(jié)果表明：豬品種因素對(duì)PID1 mRNA表達(dá)量具有顯著影響效應(yīng)（P<0.05），總體表現(xiàn)為：萊蕪豬>魯萊黑豬>大白豬。組織因

5、素對(duì)PID1mRNA表達(dá)量具有顯著影響效應(yīng)（P<0.05），總體表現(xiàn)為：肝臟>脂肪>肌肉。品種與組織之間的互作對(duì)該基因表達(dá)量也具有顯著影響效應(yīng)（P<0.05）；對(duì)于高IMF（LWH）、中等IMF（LWI）和低IMF（LWL）沉積的3組萊蕪豬，IMF沉積因素對(duì)PID1 mRNA表達(dá)量具有顯著影響效應(yīng)（P<0.05），總體表現(xiàn)為：LWH>LWI>LWL。組織因素對(duì)PID1 mRNA表達(dá)量具有顯著影響效應(yīng)（P<0.05），總體表現(xiàn)為：肝臟>脂