應用重組MSG1蛋白檢測豬附紅細胞體抗體的ELISA方法的建立及其單克隆抗體的制備.pdf

1、豬附紅細胞體(Mycoplasmasuis，M.suis)是一種寄生于豬紅細胞表面、血漿及骨髓中的微生物，能夠引起豬的發(fā)熱、貧血、黃疸等臨床癥狀的人畜共患性傳染病。鑒于臨床豬附紅細胞體病造成的巨大的經(jīng)濟損失，對于豬附紅細胞體研究成果向?qū)嵺`轉(zhuǎn)化的需求顯得尤為迫切。其中對MSG1蛋白的研究相對較多，將其作為研究對象較為合適，于是確定了本課題研究思路。
　　 采用人工構(gòu)建的重組大腸桿菌進行MSG1蛋白的體外表達，對蛋白在大腸桿菌BL2

2、1菌株的表達情況進行了初步分析：隨后將此蛋白作為檢測抗原建立ELISA方法進行臨床豬附紅細胞體病的檢測，并設立了敏感性試驗、特異性試驗、符合性試驗和重復性試驗，對建立的ELISA方法進行有效性評估；最后將MSG1蛋白接種小鼠，建立雜交瘤細胞系，篩選陽性克隆，獲取單克隆細胞株，進行單克隆抗體的生產(chǎn)。
　　 通過試驗，發(fā)現(xiàn)豬附紅細胞體MSG1蛋白在BL21菌株表達系統(tǒng)能以包涵體的形式進行大量表達，并且獲得了純化MSG1蛋白；MSG1

3、蛋白有良好的抗原性，以MSG1蛋白建立的ELISA方法用于臨床檢測豬附紅細胞體病感染率為46.25％，其中陽性樣本對已知小鼠抗血清有明顯的阻斷作用，并且與其他一些抗原無交叉反應，此ELISA方法的特異性和敏感性分別可達到97.06％和95.92％，較間接血凝試驗(IHA)有更高的檢出率；通過建立的雜交瘤技術(shù)，獲得了兩株能穩(wěn)定分泌抗體的單克隆細胞系。
　　 本試驗的成果為進一步研究MSG1蛋白奠定了基礎，為豬附紅細胞體病的診斷提供