禽白血病快速診斷方法的研究.pdf

1、本研究針對(duì)禽白血病，采集種雞場(chǎng)血樣進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，并采集病雞的組織樣品進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。針對(duì)禽白血病病毒(ALV)的保守基因，設(shè)計(jì)引物建立常規(guī)PCR體系，將PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序，并以重組質(zhì)粒作為定量檢測(cè)的模板，選取ALV病毒的LTR序列，利用Primer Express2.0軟件設(shè)計(jì)引物和探針，建立檢測(cè)ALV的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法。
　　 血清學(xué)試驗(yàn)證明所檢測(cè)的種雞場(chǎng)有疑似禽白血病臨床癥狀的禽白血病的陽性率為53.3％。

2、通過病理組織學(xué)觀察，病雞的肝臟、脾臟，法氏囊和腺胃中有大量的髓細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞。建立的熒光定量PCR方法最低可檢出30個(gè)拷貝的重組質(zhì)粒。該方法具有特異性，對(duì)新城疫病毒，禽流感病毒、傳染性支氣管炎病毒、傳染性法氏囊病毒、雞傳染性貧血病毒、傳染性喉支氣管炎病毒和馬立克氏病毒核酸都沒有擴(kuò)增反應(yīng)。利用建立的實(shí)時(shí)定量PCR方法對(duì)臨床90個(gè)待檢樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢出56個(gè)陽性，陽性率為62.2％。實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)ALV的方法，靈敏度高，特異性好，