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1、探究動(dòng)物的攝食行為,不論是對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)效益的提升,還是對(duì)人類代謝相關(guān)疾病的研究都有重大的科研價(jià)值。以往的研究表明,中樞神經(jīng)系統(tǒng)在動(dòng)物攝食行為產(chǎn)生的過程中發(fā)揮了重要的調(diào)控作用,而下丘腦是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中調(diào)節(jié)動(dòng)物代謝的關(guān)鍵部位。本課題的目的旨在通過改造狂犬病毒,將其作為神經(jīng)環(huán)路示蹤工具,對(duì)下丘腦中攝食相關(guān)核團(tuán)的神經(jīng)環(huán)路進(jìn)行探究。
本實(shí)驗(yàn)主要分為三個(gè)部分:第一,利用缺失病毒毒力基因G蛋白、帶有熒光蛋白的狂犬病毒,針對(duì)下丘腦區(qū)域的五個(gè)攝
2、食相關(guān)核團(tuán)——下丘腦室旁核、下丘腦背內(nèi)側(cè)核、下丘腦腹內(nèi)側(cè)核、弓狀核、下丘腦外側(cè)區(qū),在全腦范圍內(nèi)示蹤對(duì)其有軸突投射的神經(jīng)元。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,主要有額眶部皮層、外側(cè)隔核、視前內(nèi)側(cè)區(qū)、視前內(nèi)側(cè)核、終紋床核、杏仁核、腹側(cè)被蓋區(qū)、藍(lán)斑、臂旁核、水管周灰質(zhì)等核團(tuán)將其軸突投射到了下丘腦這五個(gè)核團(tuán);第二,構(gòu)建EnvA/TVA病毒示蹤體系,實(shí)現(xiàn)狂犬病毒“定位、跨突觸可受調(diào)控”的感染模式,最終該示蹤體系構(gòu)建成功并在鼠腦上得到驗(yàn)證;第三,為了構(gòu)建含有水泡性口炎
3、病毒和狂犬病毒嵌合G蛋白的B7B-VSV SADG細(xì)胞系,從而實(shí)現(xiàn)狂犬病毒對(duì)注射區(qū)域神經(jīng)元的胞體集中且高效的感染模式。利用CRISPR/Cas9技術(shù)手段,改造B7GG細(xì)胞——將該細(xì)胞系基因組中的G蛋白變?yōu)榍逗螱蛋白,并將藍(lán)色熒光蛋白替換掉綠色熒光蛋白,最終利用潮霉素壓力篩選和流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行了純化,后期可通過進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)完成細(xì)胞系的建立。
對(duì)動(dòng)物攝食行為有調(diào)控作用的神經(jīng)系統(tǒng)錯(cuò)綜復(fù)雜,利用靈活高效的嗜神經(jīng)性病毒作為示蹤工
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