京尼平對DIO大鼠下丘腦內炎癥細胞因子及攝食相關神經肽表達的調節(jié).pdf

1、目的:
　　1.通過高脂飲食誘導的肥胖大鼠模型證實京尼平的降脂減肥作用。
　　2.初步探索京尼平降脂減肥的中樞機制。
　　方法:
　　選取清潔級雄性Wistar大鼠98只(200±20g),在適應性喂養(yǎng)一周后開始實驗,隨機分為正常對照組15只和高脂飲食組83只,分別給予基礎飼料和高脂飼料喂養(yǎng),每周測量體重一次,喂養(yǎng)12周后,選取高脂飲食組體重超過正常對照組平均體重20％者作為成模大鼠,共39只。將此成模大鼠再隨機

2、分為3組,分別為食源性肥胖組(diet induced obesity,DIO)13只,京尼平低劑量組13只,京尼平高劑量組13只,繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)。京尼平低劑量組每日腹腔注射京尼平7mg/kg,京尼平高劑量組每日腹腔注射京尼平14mg/kg,連續(xù)注射10天,每日測量大鼠體重及攝食量。10天之后,每組選取3只進行灌流取腦,制作冰凍切片,免疫熒光染色觀察大鼠下丘腦神經肽Y(neusopeptide Y, NPY)的表達情況。其余大鼠處

3、死,取血,檢測血清中甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的含量,ELISA法檢測血清中瘦素含量。剝離睪丸周圍,腎周圍和網膜周圍脂肪組織,計算各組大鼠的脂肪指數。取下丘腦組織測定其ATP水平,線粒體膜電位(motichondrial membrane potential,MMP)和線粒體活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,采用RT-qPCR

4、法檢測下丘腦中腫瘤壞死因子-α(tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、NPY及阿片促黑色素原(proopiomelanocortin,POMC)的mRNA表達。
　　結果:
　　1.食源性肥胖大鼠模型的建立
　　經過12周的高脂飲食喂養(yǎng),成模大鼠共計39只,其平均體重大于正常對照組大鼠平均體重的20％,達到肥胖成模標準。
　　2.京尼

5、平對大鼠肥胖相關指標的影響
　　(1)京尼平減輕肥胖大鼠體重
　　與DIO組大鼠相比,腹腔注射京尼平10天后,京尼平低劑量和高劑量組大鼠體重均顯著減輕,其中京尼平低劑量組較給藥前減少37.18±7.02g(P＜0.01),高劑量組較給藥前減少62.87±13.46g(P＜0.01),說明京尼平能夠有效減輕食源性肥胖大鼠的體重。
　　(2)京尼平減少肥胖大鼠攝食量
　　經過10天的京尼平腹腔注射,京尼平低劑量與高劑

6、量組大鼠的攝食量均低于DIO組大鼠的攝食量(P＜0.05),京尼平有效地減少了食源性肥胖大鼠的攝食量。
　　(3)京尼平降低肥胖大鼠脂肪指數
　　給予腹腔注射京尼平后,與DIO組大鼠相比,京尼平高劑量組大鼠的脂肪指數降低了1.78％(P＜0.01),食源性肥胖大鼠的體脂含量顯著減少。
　　3.京尼平改善肥胖大鼠血脂水平
　　DIO組大鼠血清中TG的含量高于正常對照組,HDL-C的含量顯著地低于正常對照組,說明DI

7、O組大鼠出現了一定程度的血脂紊亂。給予腹腔注射京尼平后,與DIO組大鼠相比,京尼平低劑量組大鼠血清中TG和LDL-C的含量有下降的趨勢,但差異不具有統計學意義,HDL-C的含量有所增多(P＜0.05)。京尼平高劑量組大鼠血清中TG含量顯著降低(P＜0.01),LDL-C的含量降低(P＜0.05),而HDL-C的含量顯著升高(P＜0.01)。
　　4.京尼平降低肥胖大鼠下丘腦ATP水平
　　與DIO組大鼠相比,京尼平低劑量組大

8、鼠下丘腦內ATP水平有下降的趨勢,但結果不具有統計學意義。京尼平高劑量組大鼠下丘腦內ATP水平降低26.72％,減少了食源性肥胖大鼠下丘腦內的ATP水平。
　　5.京尼平對大鼠下丘腦線粒體膜電位和ROS的影響
　　各組大鼠間下丘腦線粒體膜電位水平并無顯著性差異,而DIO組大鼠下丘腦線粒體ROS水平較正常對照組升高(P＜0.05)。給予京尼平干預后,京尼平各組大鼠下丘腦內線粒體ROS水平均較DIO組顯著降低(P＜0.01),其

9、中京尼平低劑量組降低了51.81％,京尼平高劑量組降低了57.27％。
　　6.京尼平抑制大鼠下丘腦內TNF-α mRNA和IL-6 mRNA的表達
　　以正常對照組大鼠為標準,DIO組大鼠下丘腦內TNF-α mRNA和IL-6 mRNA含量顯著升高(P＜0.01),提示DIO組大鼠腦內出現了一定程度的炎癥反應,經京尼平干預后,京尼平低劑量組大鼠下丘腦內TNF-α mRNA水平降低(P＜0.05),IL-6mRNA水平有減少

10、的趨勢,但差異不具有統計學意義;京尼平高劑量組大鼠下丘腦內TNF-α mRNA和IL-6 mRNA水平顯著降低(P＜0.01)。
　　7.京尼平降低肥胖大鼠血清瘦素水平
　　與正常對照組大鼠相比,DIO組大鼠血清瘦素水平升高(P＜0.05),表現為高瘦素血癥,而經京尼平干預后的DIO大鼠血清瘦素水平均顯著降低(P＜0.01)。
　　8.京尼平對大鼠下丘腦攝食相關神經肽水平的影響
　　(1)京尼平抑制肥胖大鼠下丘腦

11、NPYmRNA轉錄及蛋白表達
　　以正常對照組大鼠為標準,DIO組大鼠下丘腦內NPY mRNA表達顯著增多(P＜0.01),京尼平低劑量及高劑量組大鼠下丘腦內NPY mRNA表達顯著降低(P＜0.01),各組蛋白表達情況與此相同。
　　(2)京尼平促進肥胖大鼠下丘腦POMC mRNA轉錄
　　以正常對照組大鼠為標準,經京尼平干預后,京尼平低劑量與高劑量組大鼠下丘腦內POMC mRNA的表達均顯著上調(P＜0.01)。<