阿爾巴斯絨山羊FGF5基因敲除的研究.pdf

1、FGF5基因的突變可導致多種哺乳動物毛囊生長期的延長以及毛被長度的顯著增加，提示可以通過抑制該基因的表達提高阿爾巴斯絨山羊的產絨量。本研究旨在通過基因敲除的方式建立轉基因體細胞系，并以該細胞系為核供體進行體細胞核移植，生產敲除 FGF5基因的克隆絨山羊。
　　首先，以組織塊貼壁法原代培養(yǎng)獲得的阿爾巴斯絨山羊胎兒皮膚成纖維細胞生長狀態(tài)良好，可用于基因打靶和體細胞核移植。
　　其次，轉染后經正負篩選共獲得51個細胞克隆，擴繁后最

2、終凍存12個克隆。提取基因組 DNA進行 PCR擴增鑒定得到5個陽性克隆，再提取總 RNA進行 RT-PCR鑒定后確定其中4個為陽性。與普通成纖維細胞相比，所得敲除 FGF5基因陽性細胞克隆在細胞形態(tài)、性狀及生長特性等方面均發(fā)生了極其顯著的變化：細胞體積增大；邊界模糊，立體感降低；生長速率明顯下降；胰蛋白酶消化所需時間明顯增加。
　　以轉基因陽性細胞克隆為核供體，體外培養(yǎng)成熟的山羊卵母細胞為核受體進行體細胞核移植，形成的重構胚可發(fā)