PGIP基因轉(zhuǎn)化‘美人指’葡萄的研究.pdf

1、本研究以‘美人指'葡萄（Vitis viniferaL.‘Manicure Finger'）為材料，建立‘美人指'葡萄不定芽再生體系和體細(xì)胞胚胎發(fā)生與植株再生體系;采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PGIP基因?qū)搿廊酥?葡萄中，以期獲得定向改良抗病性狀的‘美人指'葡萄新種質(zhì)。本實驗研究結(jié)果如下:
　　 1.以‘美人指'葡萄為試材，研究了不同外植體類型、激素濃度配比以及暗培養(yǎng)時間等對不定芽再生的影響。結(jié)果表明:葉片、葉柄、莖段外植體均可再生出

2、不定芽，其中葉柄的再生率最高;TDZ對‘美人指'葡萄葉柄再生效果比6-BA好，IBA誘導(dǎo)‘美人指'葡萄葉柄不定芽再生率高于NAA和2，4-D;暗培養(yǎng)3w時，‘美人指'葡萄葉柄的再生率最高。葉片再生的最適培養(yǎng)基為:MS+1.0 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1IBA，再生率為60.71％，增值系數(shù)為5.65;葉柄再生的最適培養(yǎng)基為:MS+1.0 mg·L-1TDZ+0.1 mg·L-1 IBA，再生率為93.10％，增殖系數(shù)為5

3、.91;莖段再生的最適培養(yǎng)基為:MS+1.0 mg·L-1 TDZ+0.2 mg·L-1 IBA，再生率為47.37％，增殖系數(shù)為5.00。將再生不定芽置于3/4 MS+0.35 mg·L-1 IBA培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。完整植株培養(yǎng)35～50 d后煉苗移栽，成活率可達90％。
　　 2.以‘美人指'的花藥和雌蕊為試材，進行體細(xì)胞胚誘導(dǎo)與再生體系的建立。花藥和雌蕊在單核靠邊期進行收集，培養(yǎng)在附加不同濃度6-BA和2，4-D的MS培養(yǎng)

4、基上誘導(dǎo)胚性愈傷組織，培養(yǎng)條件為黑暗，25±2℃。3個月后，花藥和雌蕊誘導(dǎo)產(chǎn)生胚性愈傷組織，胚性愈傷誘導(dǎo)率分別為3.51％和4.55％。在附加1.0 mg·L-16-BA的MS基本培養(yǎng)基上誘導(dǎo)體細(xì)胞胚狀發(fā)生。魚雷胚階段的體細(xì)胞胚在未添加任何激素的MS培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為83.89±8.39％。成熟的胚狀體在0.15 mg·L-1 IBA和0.5 g·L-1 AC的組合下，成苗率高達72.33±12.21％。通過胚胎在胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基