西瓜噬酸菌遺傳操作系統(tǒng)的建立及選擇性培養(yǎng)基的研制.pdf

1、瓜類細(xì)菌性果斑?。˙acterialfruitblotch，BFB）是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重危害葫蘆科植物的一種檢疫性細(xì)菌病害，其病原為西瓜噬酸菌(Acidovoraxcitrulli)。迄今為止，對西瓜噬酸菌的研究多側(cè)重于鑒定、生物學(xué)特性、病害發(fā)生規(guī)律等方面，對于其致病機(jī)理及致病相關(guān)基因的研究卻很少。同時(shí)現(xiàn)有技術(shù)對該病害的防治也只是減輕危害，并不能完全控制該病害。因此，西瓜噬酸菌的致病相關(guān)基因及其致病機(jī)理的研究對于病害防治至關(guān)重要。
　

2、　本實(shí)驗(yàn)室利用Mini-Tn5轉(zhuǎn)座子隨機(jī)插入的方法，通過三親交配原理成功構(gòu)建了野生型xjl12的突變體文庫。同時(shí)篩選出在煙草上不能激發(fā)過敏性反應(yīng)，對哈密瓜幼苗致病性下降的突變體，進(jìn)而研究了部分致病基因的功能。但由于西瓜噬酸菌遺傳系統(tǒng)的復(fù)雜性，得到同源雙交換突變體的概率非常低，目前都是利用傳統(tǒng)的同源重組方法，得到單交換缺失突變體，再通過回補(bǔ)和過表達(dá)來驗(yàn)證基因功能。
　　本實(shí)驗(yàn)在傳統(tǒng)方法上進(jìn)行改進(jìn)，將在蔗糖板上長勢較差的西瓜噬酸菌進(jìn)行

3、適應(yīng)性篩選，最后利用蔗糖來篩選雙交換突變株。同時(shí)，在細(xì)菌兩親交配之后，省去得到單交換突變株的步驟，直接在蔗糖抗性平板上篩到雙交換突變株，雖然平板上仍有單交換突變株長出，但得到雙交換突變株的概率大幅度提高。因此本實(shí)驗(yàn)遺傳操作系統(tǒng)的成功建立，為西瓜噬酸茵功能基因的研究提供了更可靠、更高效的依據(jù)。
　　基于目前利用TWZ選擇性培養(yǎng)基分離西瓜噬酸菌時(shí)，其上有一種生長較快，且易產(chǎn)生假陽性的細(xì)菌，本實(shí)驗(yàn)通過16SRNA測序、BIOLOG系統(tǒng)測