3種致病性弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制.pdf

1、水產(chǎn)品是人類賴以生存的基礎物質(zhì)和重要蛋白來源,深得消費者的喜愛,消費量也在日益提高。致病性弧菌是水產(chǎn)品中引發(fā)人體疾病的主要致病菌,會引發(fā)人的季節(jié)性傳播流行性的腸道疾病,導致人類發(fā)生嚴重的腹瀉等消化道疾病或創(chuàng)傷感染病變、創(chuàng)傷感染或發(fā)生敗血癥,甚至死亡。研究和建立致病性弧菌快速檢測的新技術和新方法受到各國研究機構的重視。用選擇性鑒別培養(yǎng)基即可滿足抽檢率,更真實的反應水產(chǎn)品的污染狀況,又能克服標準方法的費時、繁瑣和成本較高等許多不足。

2、　　 本論文主要圍繞以下幾個方面開展了一些工作:
　　 1霍利斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于霍利斯弧菌的基礎營養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過單因素試驗結合響應面組合試驗得到如下結果:培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.11％(胰蛋白胨:魚蛋白胨為1:1)、酵母浸膏0.210％、NaCl2.13％、pH7.5;培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法

3、的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.39倍,增菌效果明顯。
　　 以霍利斯弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點和對某些特定抑菌成分的抵抗力為基礎,設計研制了霍利斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VhDM)。試驗中對VhDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進行評價。結果顯示:VhDM對霍利斯弧菌具有較好的選擇性和特異性;用VhDM在36±1℃培養(yǎng)16 h～24 h,霍利斯弧菌菌落為黃色;其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈紅色或未形成有效的

4、可見菌落;VhDM對霍利斯弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(90.65±1.72)％;檢出限為101 cfu/mL;因此,VhDM對海產(chǎn)品中霍利斯弧菌分離鑒別與檢測是可行的,且具有操作簡便、經(jīng)濟、結果易于觀察等優(yōu)點。
　　 2河弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于河弧菌的基礎營養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過單因素試驗結合響應面組合試驗得到如下結果:培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.24％(胰蛋白胨:魚蛋白胨為1:3

5、)、酵母浸膏0.204％、NaCl1.81％、pH8.0;培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.59倍,增菌效果明顯。
　　 以河弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點和對某些特定抑菌成分的抵抗力為基礎,設計研制了河弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VfDM)。試驗中對VfDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進行評價。結果顯示:VfDM對河弧菌具

6、有較好的選擇性和特異性;用VfDM在36±1℃培養(yǎng)18 h～24 h,河弧菌菌落為深褐色;其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈紅色或未形成有效的可見菌落;VfDM對河弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(92.80±2.88)％;檢出限為101 cfu/mL;因此,VfDM對海產(chǎn)品中河弧菌分離鑒別與檢測是可行的,且具有操作簡便、經(jīng)濟、結果易于觀察等優(yōu)點。
　　 3弗尼斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基的研制基于弗尼斯弧菌的基礎營養(yǎng)和特殊生態(tài)環(huán)境需求

7、,優(yōu)化了其增菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。通過單因素試驗結合響應面組合試驗得到如下結果:培養(yǎng)基組成成分為混合蛋白胨2.08％(胰蛋白胨:魚蛋白胨為1:3)、酵母浸膏0.221％、NaCl1.94％、pH8.5;培養(yǎng)溫度為36±1℃。經(jīng)過8h增菌后,該培養(yǎng)基的菌液濃度是GB/T4789.7-2008中規(guī)定方法的堿性蛋白胨水(APW)增菌菌液濃度的1.48倍,增菌效果明顯。
　　 以弗尼斯弧菌特有的酶系統(tǒng)及其代謝特點和對某些特定抑菌成分的抵抗

8、力為基礎,設計研制了弗尼斯弧菌選擇性鑒別培養(yǎng)基(VfuDM)。試驗中對VfuDM的顯色效果、平板效率、靈敏度和特異性進行評價。結果顯示:VfuDM對弗尼斯弧菌具有較好的選擇性和特異性;用VhDM在36±1℃培養(yǎng)18 h～24 h,弗尼斯弧菌菌落為黃色;其它各種弧菌及非弧菌屬致病菌菌落呈藍色或未形成有效的可見菌落;VfuDM對弗尼斯弧菌的出菌效率與嗜鹽瓊脂相比為(92.98±2.58)％;檢出限為101cfu/mL;因此,VfuDM對海產(chǎn)

9、品中弗尼斯弧菌分離鑒別與檢測是可行的,且具有操作簡便、經(jīng)濟、結果易于觀察等優(yōu)點。
　　 通過增菌培養(yǎng)基與選擇性鑒別培養(yǎng)基結合檢測3種致病性弧菌的方法,與常規(guī)方法(TCBS結合法國梅里埃細菌鑒定系統(tǒng)API20E試劑條或弧菌科生化鑒定管)相比,提高了目的菌的檢出率,檢測結果直觀,易于觀察,靈敏度高、特異性強,且降低檢測成本,操作簡便,減少工作量,具有更高的檢測效率和鑒別能力,為構建同時快速篩檢12種致病性弧菌的增菌和選擇性鑒別培養(yǎng)基