不同竹種再生能力的比較及轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、竹子轉(zhuǎn)基因技術(shù)尚未成熟，主要的障礙是無法建立起高效穩(wěn)定的竹子再生體系。本文參考已建立的版納甜龍竹再生體系的研究方法，以9屬24種竹子的成熟種胚為材料，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生的研究，篩選出了分屬于4個(gè)屬的6個(gè)再生能力較強(qiáng)的竹種，在此基礎(chǔ)上對泰國巨竹、印尼巨竹和云南巨竹的再生體系進(jìn)行優(yōu)化。同時(shí)，開展了相關(guān)的轉(zhuǎn)基因研究。主要的研究結(jié)果如下:
　　 1.不同竹種再生能力的比較
　　 采用版納甜龍竹再生體系所用的愈傷組織誘導(dǎo)和

2、增殖培養(yǎng)基。在相同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，9屬23種竹子均都誘導(dǎo)出愈傷組織，且愈傷組織誘導(dǎo)率不同，最高可達(dá)98.34％，分屬于簕竹屬、牡竹屬、巨竹屬、泰竹屬的7個(gè)竹種可誘導(dǎo)出致密顆粒狀愈傷組織。將版納甜龍竹的分化培養(yǎng)基中NAA濃度降低為0.3 mg·L-1，在此培養(yǎng)基中，灰竿竹、印尼巨竹、云南巨竹、泰國巨竹能分化出正常植株，小葉龍竹分化出白紫色畸形苗，爪哇巨竹僅分化出白化苗，泰竹的愈傷組織僅變綠，不能分化出植株。研究表明，簕竹屬、牡竹屬、巨竹屬

3、的再生能力較強(qiáng);版納甜龍竹再生體系所用的培養(yǎng)基有一定通用性，但不同的竹種間仍存在差異。
　　 2.竹子再生體系的優(yōu)化
　　 (1)對泰國巨竹和云南巨竹愈傷組織誘導(dǎo)階段2，4-D濃度進(jìn)行篩選，結(jié)果表明，適宜其愈傷組織誘導(dǎo)的2，4-D濃度為3 mg·L-1，與版納甜龍竹再生體系中所用的一致。在此培養(yǎng)基中，泰國巨竹的愈傷組織誘導(dǎo)率和致密、顆粒狀愈傷組織誘導(dǎo)率分別為97.83％和31.23％，云南巨竹的愈傷組織誘導(dǎo)率和致密、顆粒

4、狀愈傷組織誘導(dǎo)率分別為100％和43.91％。
　　 (2)在泰國巨竹和印尼巨竹的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加3mg·L-1ABA，有利于致密、顆粒狀愈傷組織的產(chǎn)生，提高愈傷組織的分化率，且能加快分化的進(jìn)程;在云南巨竹愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加3mg·L-1ABA，可提高胚性愈傷組織的比例和愈傷組織的增殖系數(shù)。在此培養(yǎng)基中誘導(dǎo)的云南巨竹的愈傷組織在增殖培養(yǎng)基MS+30 g·L-1sucrose+0.3 mg·L-12,4-D+500 mg·L

5、-1 Gln+500 mg·L-1 Pro+500 mg·L-1 CH+8 g·L-1 Type Aagar中，增殖系數(shù)達(dá)0.68。
　　 (3)云南巨竹優(yōu)化的分化培養(yǎng)基:MS+30 g·L-1 sucrose+1 mg·L-1 BA+1 mg·L-1 KT+0.1 mg·L-1 NAA+3 g·L-1 gelrite，愈傷組織分化率為23.33％，再生植株生長良好。
　　 3.竹子轉(zhuǎn)基因研究
　　 將與水稻分蘗