三種基因型桃不同外植體再生能力初探.pdf

1、桃是我國重要的經(jīng)濟樹種。傳統(tǒng)桃樹育種由于受到育種周期長、工作量大等因素的限制導致進程緩慢。現(xiàn)代生物技術，尤其是植物組織培養(yǎng)和基因工程的發(fā)展，為快速進行桃性狀改良提供了可能。高效穩(wěn)定的再生體系是進行轉基因技術的基礎，但是桃屬于李屬（Prunus SPP.）果樹中離體再生比較困難的樹種，影響再生的因素成為研究的關鍵，基因型、植物生長調節(jié)劑、基本培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等均對桃的再生有影響。本研究以‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃田間材料初代培養(yǎng)的葉片及

2、胚培苗的莖段、葉片、子葉、上胚軸為外植體，建立桃不同外植體再生體系，為桃遺傳轉化研究奠定基礎。主要研究結果如下：
　　1.三種基因型桃無菌材料的獲得
　　本試驗研究了取材時期和接芽狀態(tài)、滅菌方法和培養(yǎng)基四個方面對初代培養(yǎng)的影響，結果表明：采芽接種最適宜的時期為4月下旬；將‘黃水蜜’露出5~7片葉的腋芽的莖段用升汞處理6 min后，接種到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得

3、到最低污染率和最高萌芽率分別為11.1％和為58.7%；將‘秋蜜紅’剛抽生嫩梢的莖段用升汞處理7 min后，接種到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分別為16.7%和24.3%；將毛桃露出5~7片葉的腋芽的莖段用升汞處理7 min后，接種到MS+6-BA1.5 mg/L+ NAA0.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L中得到最低污染率和最高萌芽率分別為

4、19.4%和55.7%；
　　2.三種基因型桃不同外植體離體再生的研究
　?。?）莖段離體再生
　　以‘黃水蜜’桃胚培苗莖段為外植體，探討了不同植物生長調節(jié)劑質量濃度組合對不定芽誘導過程中愈傷組織形成率和不定芽形成率的影響，并采用兩步生根法研究不同植物生長調節(jié)劑種類對不定根誘導的影響。結果表明，適合‘黃水蜜’桃胚培苗莖段切口處愈傷組織再生的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+ NAA0.5 mg/L+ AgNO

5、30.5 mg/L，不定芽再生的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L，其愈傷組織形成率和不定芽再生率分別為85%和47%；獲得的不定芽先后經(jīng)WPM+ ZT2.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+ AgNO30.5 mg/L和MS+ NAA0.5 mg/L+ GA30.5 mg/L+ AgNO30.5 mg/L兩步生根法培養(yǎng)后，不定根再生率為50%，平均根數(shù)為5.00。初步

6、建立了‘黃水蜜’桃胚培苗莖段再生體系，為桃遺傳轉化研究奠定基礎。
　?。?）葉片離體再生
　　本試驗研究了不同植物生長調節(jié)劑對桃葉片愈傷組織形成率的影響，試驗結果表明：誘導初代培養(yǎng)桃葉片產生愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+ ZT3.0 mg/L+2,4-D0.6 mg/L+AgNO30.5 mg/L，其中毛桃、‘黃水蜜’和‘秋蜜紅’，愈傷組織形成率最高分別可達93.3%、70.0%和47.7%，褐化率最低分別為37.3%、50.

7、3%和48.0%；
　　本試驗研究了不同植物生長調節(jié)劑對‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃三種不同基因型胚培苗葉片愈傷組織形成率和愈傷組織形態(tài)的影響，結果表明：愈傷組織形成率可達100%，根據(jù)愈傷組織形態(tài)得出胚培苗葉片愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基為MS+ ZT4.0mg/L+2,4-D0.8 mg/L+ AgNO30.5 mg/L；
　?。?）子葉離體再生
　　取培養(yǎng)45 d左右的‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃三種不同基因型胚培苗

8、子葉，橫切2~3刀，遠軸面接觸培養(yǎng)基接種至MS+ NAA0.1 mg/L+ TDZ2.0 mg/L+ AgNO30.5 mg/L培養(yǎng)基，培養(yǎng)45 d后發(fā)現(xiàn)只有‘秋蜜紅’部分子葉切口處產生不定芽；
　?。?）上胚軸離體再生
　　取培養(yǎng)45 d左右的‘黃水蜜’、‘秋蜜紅’和毛桃三種不同基因型胚培苗，每個胚培苗切取1~2個上胚軸切段，切成1~2 cm長的切段，接種至MS+ NAA0.1 mg/L+6-BA2.0 mg/L+ AgN