西瓜Rab18、BURP domain-containing protein17基因的克隆、序列分析及表達(dá)研究.pdf

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：編號(hào)：2012210145碩士學(xué)位論文西瓜西瓜Rab18、BURPdomaincontainingprotein17基因的克隆、序列分析及表達(dá)基因的克隆、序列分析及表達(dá)研究研究Molecularcloning、sequenceacterizationexpressionpatternofRab18、BURPdomaincontainingprotein17genefromCitrulluslanatus碩士研究碩士

2、研究生：生：肖鑫麗肖鑫麗指導(dǎo)教師：彭磊彭磊副教授教授申請(qǐng)學(xué)位類申請(qǐng)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：果樹(shù)果樹(shù)學(xué)培養(yǎng)學(xué)院：園林園藝學(xué)院園林園藝學(xué)院二O一五年五月年五月西瓜Rab18、BURPdomaincontainingprotein17基因的克隆、序列分析及表達(dá)研究I摘要分離與鑒定目的基因是研究基因結(jié)構(gòu)、揭示基因功能和信號(hào)調(diào)控運(yùn)輸?shù)幕A(chǔ)，因此，克隆功能基因成為了生物科學(xué)領(lǐng)域研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本研究從麒麟瓜葉子中提取出mRNA為試驗(yàn)材料，通

3、過(guò)RACEPCR方法首次在麒麟瓜中克隆出了Rab18基因（GenBank登錄號(hào):KM235552.1）和BURPdomaincontainingprotein17基因（GenBank登錄號(hào):KM235553.1)，并在此基礎(chǔ)上，依據(jù)生物信息學(xué)工具初步分析了兩個(gè)基因的蛋白序列特性，為后續(xù)深入研究?jī)蓚€(gè)基因在西瓜中的功能奠定基礎(chǔ)，也為克隆西瓜功能基因提供了一種新的方法。主要試驗(yàn)方法和結(jié)論如下：1.根據(jù)西瓜EST數(shù)據(jù)庫(kù)中的已有序列，采用RACE

4、PCR的方法首次獲得Rab18基因的全長(zhǎng)cDNA序列1010bp，包含645bp開(kāi)放閱讀框，編碼214個(gè)氨基酸。利用Protparam軟件對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行分析，可知Rab18蛋白的等電點(diǎn)為5.97，分子量為23762.12。利用EXPASY提供的軟件分析，結(jié)果表明Rab18蛋白不具有疏水性，是一類不含有信號(hào)肽的非跨膜蛋白，其蛋白序列二級(jí)結(jié)構(gòu)由26.64%α螺旋，30.37%延伸鏈，9.35%β轉(zhuǎn)角，33.64%隨機(jī)卷曲組成。通過(guò)Clus

5、talW軟件進(jìn)行序列同源性比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)分析，結(jié)果顯示西瓜Rab18基因與其他物種的氨基酸序列如黃瓜、甜瓜、桑葚、番茄、葡萄及馬鈴薯等有高度的同源性，分別為99%、98%、90%、89%、89%、88%。利用實(shí)時(shí)熒光定量分析顯示，西瓜Rab18基因在根、莖、葉中表達(dá)量較高，在花中表達(dá)量適度，在果實(shí)中表達(dá)量較弱。2.根據(jù)西瓜EST數(shù)據(jù)庫(kù)中的已有序列，并通過(guò)RACEPCR的方法首次獲得BURPdomaincontainingprotein17

6、基因的全長(zhǎng)1085bpcDNA序列1085bp，包含開(kāi)放閱讀框996bp，編碼331個(gè)氨基酸，利用Protparam軟件對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行分析，可得BURPdomaincontainingprotein17基因的等電點(diǎn)為6.89，分子量為37446.12。利用EXPASY提供的軟件分析，BURPdomaincontainingprotein17蛋白具有疏水區(qū)域，是一類含有信號(hào)肽的跨膜蛋白，其蛋白序列二級(jí)結(jié)構(gòu)由24.77%α螺旋，19.94