酶聯(lián)免疫吸附法檢測磺胺對甲氧嘧啶殘留的研究.pdf

1、該論文開展了這方面的初步研究工作,以期探討測定SMD殘留的靈敏、快速、方便的檢測方法,為科學研究與實際應用提供資料.用戊二醛法將SMD與載體蛋白BSA偶聯(lián)制備合成抗原SMD-BSA用作免疫原,同法合成包被抗原SMD-OVA,選擇幾種免疫程序,免疫健康家兔,篩選最佳免疫程序,獲得抗血清,用雙向瓊脂擴散試驗對抗血清進行定性測定,結果表明抗血清特異性針對SMD.用ELISA法對抗血清進行定量測定抗血清之效價,其效價為1:2560,同時,用EL

2、ISA試驗對抗血清進行了鑒定,分別以OVA、SMD-OVA、BSA、SMD-BSA進行包被,結果抗血清對OVA包被孔吸光值較低,而對SMD-OVA包被孔吸光值較高,表明抗血清中的確存在抗SMD抗體,結果與瓊脂擴散試驗的結果一致.以上結果表明所獲得的抗血清符合要求,能用于實際樣品的檢測.用所制備的抗血清建立間接競爭ELISA方法.優(yōu)選了ELISA的工作條件,方陣測定確定了包被抗原最佳包被濃度(50μg/mL),抗血清最佳稀釋度(1:100

3、),酶標抗體的最適工作稀釋度(1:500),并建立了ELISA標準工作曲線.工作曲線表明在10~2000μg/L濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系,超過2000μg/L則線性關系不好.該法檢測底限為63μg/L,低于國際規(guī)定殘留限量(100μg/kg)和國內(nèi)規(guī)定殘留限量(300μg/kg)的要求.按建立的ELISA方法測定了方法的回收率,結果表明回收率較好,符合預期效果.建立的間接競爭ELISA法的精確度以批內(nèi)誤差和批間誤差來表示.該試驗批內(nèi)