親和層析-酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)β-,2--興奮劑的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究采用混合酸酐法制備萊克多巴胺(Ractopamine，RCT)免疫抗原和沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)免疫抗原，經(jīng)鑒定RCT免疫抗原(RCT-BSA)的偶聯(lián)比率為25.8∶1，包被抗原(RCT-OA)的偶聯(lián)比率為48.41∶1，SAL免疫抗原(SAL-BSA)的偶聯(lián)比率為12.8∶1，包被抗原(SAL-OA)的偶聯(lián)比率為18.7∶1。采用重氮化法制備克倫特羅(Clenbuterol，CL)免疫抗原，CL免疫抗原(CL-B

2、SA)的偶聯(lián)比率為24.21∶1，包被抗原(CL-OA)的偶聯(lián)比率為13.63∶1。 利用制備好的抗原免疫家兔，獲得抗RCT抗血清，抗CL抗血清，抗SAL抗血清，以制備相應(yīng)的多克隆抗體。采用間接酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(ELISA)對(duì)抗血清效價(jià)進(jìn)行了檢測(cè)，抗RCT抗血清，抗CL抗血清，抗SAL抗血清最高效價(jià)分別為1∶32000，1∶16000，1∶16000。經(jīng)鑒定三種抗血清的特異性較高和與各自抗原同系物的交叉反應(yīng)率也很低。在優(yōu)化包被

3、抗原濃度，封閉條件，抗體和酶標(biāo)二抗的濃度，顯色時(shí)間等條件的基礎(chǔ)上，采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法建立檢測(cè)RCT，CL，SAL的標(biāo)準(zhǔn)曲線，三者分別在0.55ng/mL-1.21μg/mL、2.71ng/mL-0.66μg/mL、1.48ng/mL-3.24μg/mL濃度范圍之間，呈良好的線性相關(guān)，RCT、CL、SAL的最小檢測(cè)極限0.55ng/mL、2.71ng/mL、1.48ng/mL。將各抗原以1，10，100ng/g的濃度添加時(shí)，豬肉組織

4、，豬尿液中的回收率在78.33％-119％范圍內(nèi)。在間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的基礎(chǔ)上，制備了RCT，CL，SAL間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)，可用于檢測(cè)動(dòng)物肌肉組織、尿液中RCT，CL，SAL的殘留量。 為進(jìn)一步降低檢測(cè)限，在間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA的基礎(chǔ)上，利用抗RCT抗體，抗CL抗體，抗SAL抗體制備免疫親和層析柱(IAC)，先將樣品中RCT，CL，SAL富集，再進(jìn)行間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)，建立了檢測(cè)RCT，CL，SAL留的親和層析

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