抗水稻白葉枯病細(xì)菌拮抗物質(zhì)的研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文抗水稻白葉枯病細(xì)菌拮抗物質(zhì)的研究姓名：陳衛(wèi)良申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：李德葆2001.6.1抗水稻白葉枯病細(xì)菌拮抗物質(zhì)的研究摘要拮抗細(xì)菌菌株Bacillissubtilis5、EnterobactercloacaeB8分離自水稻葉片，平皿試驗(yàn)表明它們具有對水稻白葉枯病菌的拮抗作用；Bacillussubtilts504分離自水稻根部，平皿試驗(yàn)顯示具有對水稻白葉枯病菌和水稻紋枯病菌的拮抗作用。對這三個(gè)

2、菌株產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)進(jìn)行了分離純化和部分理化性質(zhì)、防病效果的測定。f研究的主要結(jié)果如下：k一、拮抗細(xì)菌Bacillussubtilis5菌株Bacillussubtilis5菌株分離自杭州郊區(qū)的水稻葉片。平皿拈抗活性檢測結(jié)果表明該菌株具有對水稻自葉枯病菌較強(qiáng)的拮抗作用。通過菌株生長曲線的制作和活性測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)細(xì)菌生長處于對數(shù)生長中期時(shí)(0D。吸收值約為2O)開始檢測到拮抗活性，在細(xì)菌生長開始衰退前出現(xiàn)了～個(gè)拮抗活性高峰。且subtil

3、is5菌株經(jīng)KMB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后，其培養(yǎng)液經(jīng)離心去菌、硫酸銨沉淀、分子量截流試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在截流管的沖出液部分(分予量小于IOKDa)和管內(nèi)截流部分(分子量大于10KDa)均含有拮抗活性，顯示出多種拮抗物質(zhì)的存在。這二部分的拮抗物質(zhì)的活性不受熱和有機(jī)溶劑處理的影響。對蛋白酶K部分敏感拮抗粗提液經(jīng)FPLCDEAESephacel色譜柱、FPLC疏水色譜柱和HPLC反相C18色譜柱等色譜分離純化，得到二種分子量分別約為40KDa和38KD

4、a的二種拮抗蛋白，一種低分子量拮抗物質(zhì)。經(jīng)中國科學(xué)院上海生化所和北京大學(xué)進(jìn)行部份氨基酸序列的測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)38KDa的拮抗蛋白的N端12個(gè)氨基酸序列為tMRINHNIAALNT經(jīng)國際聯(lián)網(wǎng)檢測，這十二個(gè)氨基酸序列與一種細(xì)菌的鞭毛分泌蛋白有高度同源性，但分予量上有很大差異。另一個(gè)40Kda的拮抗蛋白的N端20個(gè)氨基酸序列為lAETVFKQNHAASGFLAGRYD。經(jīng)國際聯(lián)網(wǎng)檢測，發(fā)現(xiàn)與皿subtilis全序列中的一個(gè)基因有高度同源性，推測