番茄花葉病毒（ToMV）和黃瓜花葉病毒（CMV）單克隆抗體制備及ToMV在煙草上致病分子機(jī)理研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文番茄花葉病毒（ToMV）和黃瓜花葉病毒（CMV）單克隆抗體制備及ToMV在煙草上致病分子機(jī)理研究姓名：于翠申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：周雪平20040201亞組11分離物發(fā)生反應(yīng)；2株單抗既能與亞組I也能與亞組II的分離物反應(yīng)，l株單抗只能與提純病毒反應(yīng)，而不能與粗汁液中的病毒反應(yīng)。利用其中的8株CMV革抗建立了快速區(qū)分CMV不同亞組分離物的TAS—ELtSA檢測體系。與間接ELISA方法相比，TAS

2、ELISA在檢測亞組1分離物時(shí)二者沒有顯著的差異，但對于亞組11分離物，TAS—ELISA的檢測效果要優(yōu)于間接ELISA。利用TAS—ELISA方法測定了來自不同地區(qū)的197份田間樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)130份樣品為CMV，其中亞組1分離物為121份，占931％，而亞組11分離物為9份，占69％。還建立了區(qū)分CMV不同亞組分離物的免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄PCR(IC—RTPCR)檢測體系，并對TASELISA反應(yīng)中為陽性反應(yīng)的CMV分離物進(jìn)行了檢測，結(jié)果

3、表明TASELISA檢測為CMV亞組I的樣品僅能用亞組I特異性引物擴(kuò)增出約500bp的條帶，而TAS—ELISA檢測為亞組II的樣品也只能用亞組II特異性引物擴(kuò)增出約600bp的條帶。對其中的10個(gè)CMV分離物的ICRTPCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆和序列測定，序列分析表明TASELISA、ICRTPCR$fl序列測定對CMV亞組的劃分是一致的。TAS—ELISA和ICRTPCR快速區(qū)分CMV亞組I和亞組II體系的建立，為研究CMV的變異進(jìn)化提供了