雞傳染性囊病診斷技術與免疫防治的研究.pdf

1、在2000年夏季,我們自河北省南部地區(qū)高死亡率的不同雞群分離到5株(YN、WA、XT、SH和HD)雞傳染性囊病(IBD)病原.通過瓊脂凝膠沉淀試驗、血清中和試驗、致病性和病理學檢查以及電鏡觀察的結果證明,此5株病原均為IBD病毒.將5株病毒接種易感雛雞后發(fā)病癥狀明顯,其中XT和HD的死亡率分別為50﹪和65﹪,是兩株超強毒株(vvIBDV).鑒于完全致弱的疫苗免疫保護性較差,我們選擇其中毒力最強的XT株和HD株通過絨毛尿囊膜接種雞胚盲傳

2、12代,再在雞胚成纖維(CEF)細胞上連傳12代,經(jīng)對易感雛雞的致病性檢查結果表明,兩株vvIBDV均不引起雛雞發(fā)病.然后將第12代XT株和HD株CEF細胞毒進行Vero細胞適應性傳代培育18代,結果表明致弱的XT株和HD株均可在Vero細胞上生長并產(chǎn)生細胞病變(CPE),其病毒滴度XT株為10<'7.2>-10<'8.5>TCID<,50>/0.05ml和HD株為10<'5.6>-10<'8.3>TCID<,50>/0.05ml,并可

3、被抗IBDV特異血清所抑制.用HD株制備的Vero細胞毒皮下和肌肉進行免疫試驗、致病性及致瘤性檢查,證明該毒株免疫原性良好、毒力低且不返強、無致瘤性.該文首次建立了四種診斷雞傳染性囊病的新技術,即磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(PBS)代替巴比妥緩沖系統(tǒng)(BBS)進行對流免疫電泳(CIEP)技術、火箭免疫電泳(RIE)技術、雞源金黃色葡萄球菌蛋白A直接平板協(xié)同凝集試驗(SPA-CAT)和SPA-掃描免疫電鏡(SPA-SIEM)技術.試驗結果表明,與瓊脂

4、凝膠沉淀試驗(AGPT)進行比較,在檢測實驗感染雞和疑似IBD病雞的法氏囊組織抗原時,PBS-CIEP和RIE比AGPT敏感,出現(xiàn)結果早,而SPA-CAT與AGPT相當.因此,SPA-CAT、PBS-CIEP和RIE是早期診斷IBD的簡單、廉價、快速、特異且重復性好的新診斷方法.SPA-SIEM檢測組織中的IBDV時,結果直觀并易于判定病毒的大小和形態(tài).此外,該文對IBD油乳劑組織滅活苗及其與新城疫-腎型和腺胃型傳染性支氣管炎三聯(lián)油乳劑