抗豬脂肪細(xì)胞膜單鏈抗體抗體庫的構(gòu)建及表達(dá).pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抗豬脂肪細(xì)胞膜單鏈抗體抗體庫的構(gòu)建及表達(dá)姓名：丁淑燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：朱瑞良苗向陽20040520山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抗豬脂肪細(xì)胞膜單鏈抗體抗體庫的構(gòu)建及表達(dá)摘要為研究、大量制各高親和力抗豬脂肪細(xì)胞膜抗體，本實(shí)驗(yàn)從分子生物學(xué)和基因工程抗體技術(shù)的角度出發(fā)，首先構(gòu)建出抗豬脂肪細(xì)胞膜單鏈抗體，然后將單鏈抗體與噬菌體載體pCANTAB5E連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌TGl，構(gòu)建出抗豬脂肪

2、細(xì)胞膜抗體庫，經(jīng)過淘選使得抗豬脂肪細(xì)胞膜抗體得以富集。ELISA檢測鑒定富集效果，選擇陽性克隆進(jìn)行酶切鑒定。挑取陽性克隆在大腸桿菌岫2151中表達(dá)，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。本研究做了以下幾方面的內(nèi)容：1構(gòu)建抗豬脂肪細(xì)胞膜抗體庫在本實(shí)驗(yàn)室其他人員所構(gòu)建的抗豬脂肪細(xì)胞膜單鏈抗體(Smg：echainIvScFv)的基礎(chǔ)上，用SfiI和NotI將ScFv的兩端酶切，克隆入同樣用SftI和NotI酶切的噬菌體載體pCANTAB5E，CaCl2轉(zhuǎn)化

3、法將連接好的載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌TGl，構(gòu)建抗豬脂肪細(xì)胞膜噬菌體抗體庫。2對所構(gòu)建的抗體庫進(jìn)行篩選抗體庫經(jīng)輔助噬菌體援救后，用特異性抗原脂肪細(xì)胞對其進(jìn)行篩選，每輪篩選過后取噬菌體抗體庫少量感染的EColiTGl，涂板培養(yǎng)計(jì)算抗體滴度。篩選4輪使抗豬脂肪細(xì)胞膜抗體得以富集。制備重組噬菌體抗體，用ELISA檢測。3篩選出的抗體庫陽性克隆在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)4輪篩選過后的抗體庫在SOBAG培養(yǎng)后挑取單菌落制備重組噬菌體，ELISA法進(jìn)行檢測