191.昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)脫乙?；竍mcda1和ofcda1的性質(zhì)研究

1、碩士學(xué)位論文昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)脫乙?；窧mCDAl和OfCDAl的性質(zhì)研究BiochemicalcharacterizationoftheinsectchitindeacetylasesBmCDAlandOfCDAl學(xué)號(hào)：21218096完成日期：2015年5月大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要幾丁質(zhì)脫乙?；笇儆谔酋ッ?家族，能催化幾丁質(zhì)的乙酰氨基水解生成殼聚糖。昆蟲(chóng)幾丁質(zhì)脫乙酰

2、基酶1(CDAl)主要在昆蟲(chóng)蛻皮過(guò)程的表皮中表達(dá)，很可能參與新表皮中幾丁質(zhì)的裝配過(guò)程，因此具有重要的生理功能。本文以鱗翅目模式生物家蠶的BmCDAl和農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)亞洲玉米螟的OfCDAl為研究對(duì)象，主要取得以下研究結(jié)果：1利用PCR分別調(diào)取了家蠶和亞洲玉米螟中的BmCDAl和OfCDAl基因。BmCDAl和OfCDAl的開(kāi)放閱讀框分別為1620bp和1617bp。進(jìn)化分析表明，BmCDAl和OfCDAl同屬于昆蟲(chóng)GroupI幾丁質(zhì)脫乙酰基酶

3、，序列一致性高達(dá)96％，說(shuō)明鱗翅目昆蟲(chóng)CDAl可能具有很高的保守性。與真菌及細(xì)菌來(lái)源的幾丁質(zhì)脫乙?；敢粯?，序列分析表明兩者含有5個(gè)與催化相關(guān)的保守基序。2BmCDAl的基因轉(zhuǎn)錄水平研究表明，在不同組織中，Bm∞爿J在表皮中表達(dá)量最高；在不同發(fā)育過(guò)程中，BmCDAl在蛹期表達(dá)量明顯升高。說(shuō)明該酶主要存在于表皮中并且在化蛹時(shí)發(fā)揮重要功能。注射蛻皮激素12h后BmCDAJ表達(dá)量發(fā)生上調(diào)，說(shuō)明該基因的表達(dá)受蛻皮激素的調(diào)控。3選擇不同的表達(dá)系統(tǒng)

4、對(duì)不同來(lái)源的CDA進(jìn)行重組表達(dá)。在大腸桿菌中，BmCDAl以包涵體形式表達(dá)，未能實(shí)現(xiàn)分離純化；在畢赤酵母中，BmCDAl和OfCDAl能夠表達(dá)，甲醇誘導(dǎo)144h后，可以通過(guò)硫酸銨沉淀和金屬螯合層析兩步從發(fā)酵液上清中純化獲得重組蛋白。4采用熒光胺法和3甲基一2苯并噻唑酮腙法對(duì)重組表達(dá)的CDA活性進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：BmCDAl沒(méi)有檢測(cè)出酶活性。但幾丁質(zhì)結(jié)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，BmCDAl具有結(jié)合膠體幾丁質(zhì)的能力。關(guān)鍵詞：幾丁質(zhì)；幾丁質(zhì)脫乙?；?；重