辣椒游離小孢子培養(yǎng)及其顯微觀察.pdf

1、在辣椒的游離小孢子培養(yǎng)中,試驗(yàn)材料的選擇、預(yù)處理、培養(yǎng)條件和再生培養(yǎng)等都是培養(yǎng)成功與否的重要影響因素.該試驗(yàn)選用了75-7-3-1、77013、海花3號(hào)、83-58和Milord這5個(gè)不同的辣椒品種,就基因型、花蕾的選擇、預(yù)處理方式及培養(yǎng)條件對(duì)游離小孢子培養(yǎng)的影響進(jìn)行研究和探討,同時(shí)對(duì)小孢子在離體培養(yǎng)后的發(fā)育過程和培養(yǎng)產(chǎn)物的發(fā)育過程進(jìn)行了觀察.該文研究了花蕾外觀形態(tài)與其內(nèi)部小孢子發(fā)育時(shí)期之間的關(guān)系,確定了大多數(shù)小孢子處于單核靠邊期階段的

2、花蕾形態(tài)特征,結(jié)果表明當(dāng)各品種花藥內(nèi)小孢子多數(shù)處于單核靠邊期時(shí),花瓣通常為白色或是白綠色,花瓣與萼片等長(zhǎng)或者稍長(zhǎng),花藥顏色為白色或者白中發(fā)黃,花藥尖端微微發(fā)紫.通過設(shè)定不同的預(yù)處理方式,研究低溫、高溫、饑餓、秋水仙素和甘露醇處理這5種預(yù)處理方式對(duì)小孢子存活率的影響,針對(duì)5個(gè)品種選擇既可以提高小孢子存活率又可以維持小孢子活性的預(yù)處理方式.結(jié)果表明,各品種對(duì)處理的反應(yīng)不盡相同,而低溫和饑餓處理是比較有效的處理,對(duì)5個(gè)品種有較好的試驗(yàn)結(jié)果.利

3、用正交試驗(yàn)研究培養(yǎng)基類型、碳源、更換糖濃度的時(shí)間、活性碳、V<,b1>、谷氨酰胺、水解酪蛋白、AgNO<,3>、2,4-D、BA、KT、IAA和NAA這13個(gè)因素對(duì)游離小孢子培養(yǎng)的出胚率和愈傷率的影響,對(duì)5個(gè)品種的試驗(yàn)結(jié)果借助Excel和SAS進(jìn)行直觀分析和方差分析,結(jié)果表明:通過對(duì)5個(gè)品種愈傷率和出胚率結(jié)果的直觀分析,就參試的13個(gè)因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響程度進(jìn)行主次的排序,對(duì)于愈傷率而言,谷氨酰胺的影響力最大,排在2到5位的依次是碳源、

4、AgNO<,3>、V<,b1>和水解酪蛋白;對(duì)于出胚率的影響程度,前5位的因素是:碳源、AgNO<,3>、水解酪蛋白、V<,b1>和谷氨酰胺,這5個(gè)因素在小孢子發(fā)生愈傷和成胚的過程中都起著非常重要的作用.本文還就諸因素各水平對(duì)5品種的影響進(jìn)行了鄧肯新復(fù)極差分析比較,并借此選擇出提高愈傷率和出胚率的最佳配方;同時(shí)又對(duì)各品種的愈傷率和出胚率進(jìn)行了T測(cè)驗(yàn),從而得出品種基因型間產(chǎn)生愈合組織和胚狀體的差異水平.在離體培養(yǎng)過程中,對(duì)各品種的小孢子的

5、發(fā)育途徑和對(duì)愈傷組織及胚狀體的發(fā)生、發(fā)育過程進(jìn)行觀察.發(fā)現(xiàn)在海花3號(hào)和83-58中均存在小孢子的B分裂途徑,而A分裂途徑僅在83-58中可以觀察到;另外還觀察了胚由球形胚經(jīng)心形胚、魚雷胚發(fā)育到子葉胚的過程;并就發(fā)育過程經(jīng)常出現(xiàn)的組織發(fā)育不全、中途停止發(fā)育、愈傷化和畸形苗等問題進(jìn)行了總結(jié).對(duì)培養(yǎng)中獲得的愈傷組織和胚狀體進(jìn)行再生培養(yǎng),就誘導(dǎo)愈傷分化成苗和胚狀體直接培養(yǎng)成苗這2個(gè)試驗(yàn)途徑進(jìn)行初步探討,結(jié)果顯示胚狀體直接成苗的成功率高于需要進(jìn)行