甘藍(lán)游離小孢子培養(yǎng)中影響胚狀體形成的主要因素探討.pdf

1、以甘藍(lán)的19種基因型為材料，進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)。研究甘藍(lán)基因型及其影響因素對(duì)小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響，同時(shí)以EWlO、EF27、EFl4、秦甘70、秦甘80等為材料，研究花蕾長(zhǎng)度、低溫處理、高溫處理、AgN03、活性炭、激素以及pH值等對(duì)甘藍(lán)小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響。主要結(jié)果如下： 1.基因型是影響甘藍(lán)小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素。不同甘藍(lán)基因型小孢子培養(yǎng)的誘導(dǎo)率差異顯著。19個(gè)供試材料中有16個(gè)基因型能誘導(dǎo)胚狀體，其中EWl0、EF2

2、7、EW09、秦甘70、秦甘80等5個(gè)材料胚狀體誘導(dǎo)頻率較高；有3個(gè)材料無(wú)法獲得胚狀體。 2.花蕾大小對(duì)小孢子培養(yǎng)的效果有很大的影響。通過(guò)花蕾長(zhǎng)度進(jìn)行鏡檢，發(fā)現(xiàn)3.1～4.5mm的花蕾長(zhǎng)度的小孢子70％以上都處于單核靠邊期和雙核早期，表明3.1～4.5mm長(zhǎng)度花蕾是誘導(dǎo)胚狀體產(chǎn)生的最佳時(shí)期。 3.低溫預(yù)處理和適當(dāng)?shù)母邷靥幚硎切℃咦优囵B(yǎng)中提高胚狀體誘導(dǎo)頻率的重要因素。低溫預(yù)處理對(duì)小孢子胚產(chǎn)量有顯著影響，不同基因型所需預(yù)處理

3、時(shí)間不同。供試材料經(jīng)低溫預(yù)處理，小孢子胚產(chǎn)量均有明顯提高。在小孢子培養(yǎng)前對(duì)花蕾進(jìn)行0～4℃48h的低溫預(yù)處理，并且培養(yǎng)初期給予小孢子33℃24h的高溫暗培養(yǎng)，可以獲得較好的誘導(dǎo)效果。 4.培養(yǎng)基中添加AgN03對(duì)甘藍(lán)小孢子胚狀體的誘導(dǎo)沒(méi)有促進(jìn)作用，添加AgN03的處理比不添加.AgN03處理的誘導(dǎo)率略低。培養(yǎng)基中添加活性炭對(duì)甘藍(lán)小孢子胚狀體的誘導(dǎo)有明顯影響，在附加活性炭的培養(yǎng)基上，各基因型胚產(chǎn)量所占比率在總體上有大幅度的提高。

4、 5.激素在小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)中具有重要的影響作用，但不同基因型對(duì)激素的反映不同。通過(guò)對(duì)供試材料在NLN-13液體培養(yǎng)基中添加激素6-BA與NAA 5種濃度比例，進(jìn)行甘藍(lán)小孢子誘導(dǎo)胚狀體培養(yǎng)。秦甘70以無(wú)激素培養(yǎng)出胚率最高，為3.00胚/蕾；秦甘80以單一加入6-BA0.05mg/L激素出胚率最高，為3.75胚/蕾； EFl4以6-BA0.05mg/1+NAA0.5mg/L激素組合效果較好，其出胚率為2.25胚/蕾；晚豐以6-BA0.