豬干擾素-γ基因的克隆、表達(dá)及其疫苗佐劑效應(yīng)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院碩士學(xué)位論文豬干擾素γ基因的克隆、表達(dá)及其疫苗佐劑效應(yīng)研究姓名：竇永喜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：才學(xué)鵬20040601CloningandexpressionofporcineIFNygeneanditsuseasvaccineadjuvantAbstractIFN—YisadimericglycoproteiapredominantlysecretedbyTcellsandNKcells，mitog

2、enorantigenactivatedTceilclonecanalsosecretIFN吖Itplaysaveryimportantroleinresistancetovirusesintracellularbacterialandparasiticalinfections，antitumorproliferationandimmunomodu【atoryactivitiesIthasprovedthatIFN吖playedaver

3、yimportantroleinvirustherap)andispredictedtobeusedasanewadjuvantinvaccineInthisstudywecostimulatedpigperipherallymphocyIescellswithPHAandLPS，thenextractedtotalRNAfromthecellsanduseditasatemplatetoamplifythe1FN7geneusingR

4、TPCRTheamplifiedfragmentwassubsequentlyligatedintothepGEM—TeasyvectorforsequencingTheresultsrevealedthatthesequencehad100％homologywiththesequenceofIFNTgeneobtainedfromGeneBankWethendesignedprimersaccordingtotheORFsequenc

5、eoftheIFN吖geneandusedthepGEM—Teasy／plFN吖recombinantplasmidastemplateinthePCRreactionAfterdoubledigestionwithEcoRlandNotI，theamplifiedproductsandthepGEX4Tlvectorwere／igatedtogetherandtransformedintoEcolicells，thisconstruc

6、twasalsosequencedtoensurefidelityExpressionoftherecombinantplasmidwasinducedinE，coliusingIPTGresultinginahighlevelofproteinexpressionTheexpressedproductswereanalyzedbySDSPAGEandWesternblot，showingthatthe40kDaIFN—YGSTfusi

7、onwasexpressedsuccessfully，Thefusionproteinwasalsecognizedbyanti—humanIFN—Yserum，withtheexpressedproteinmakingup3050％oftotalEcoliproteinsWealsoinsertedtheIFN7geneintothepcDNA31vectorandnamedpcDNA31／plFN—Y，thenuseditasana

8、djuvantofCystieercuscellu[osaevaccinetoimmunizemiceAntibodiesweresubsequentlydetected，showingthmthepcDNA3[／plFN—vrecombinantplasmidhasapromisingroleasanadjuvant沁Cysticercuscelhdosaevaccineandmuchmorebetterthanaluminumand

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