葡萄果實中脫落酸激活的鈣依賴蛋白激酶：純化、測序及定位.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗應用膠內蛋白激酶自磷酸化分析表明，在葡萄果實微粒體中存在一種分子量約為62.5KD的鈣依賴的蛋白激酶(CDPK)，并且，外源ABA處理能激活這一蛋白激酶。由于CDPK和信號轉導有關，是一種重要的信號分子，因此我們將實驗的重點放在了這個蛋白激酶的純化上?！　≈苽淦咸压麑嵨⒘ｓw，經過大量的SDS-PAGE電泳，將目的蛋白從膠上洗下來，低壓冷凍干燥、富集，得到了電泳純的目的蛋白。應用雙向電泳(two-dimensionalgelele

2、ctrophoresis)鑒定純化產物的純度，結果表明純化產物中存在著分子量相近，但等電點不同的兩種蛋白；接著分別用葡萄果實中CDPK(VCPK1)的全長和N-端特異抗體與雙向電泳分離后的蛋白發(fā)生免疫反應，對純化產物進行進一步的鑒定，準確地將目的蛋白從純化產物中鑒定并分離出來。應用串連質譜儀(LC-MS/MS)測定目的蛋白CDPK的蛋白酶解的氨基酸序列，得到了MAPDKPLDSAVLSR；VIAEGLSEEEIGGLR；LTAHEVLS

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