apiv3c蛋白酶抑制劑的虛擬篩選及活性驗證

1、專業(yè)學位碩士學位論文ApIV3CApIV3C蛋白酶抑制劑的虛擬篩選及活性驗證蛋白酶抑制劑的虛擬篩選及活性驗證TheVirtualScreeningActivityvertificationofNovelInhibitsTargetingApIV3CProtease作者姓名：史艷麗工程領(lǐng)域：化學工程學號：31427042指導教師：李文利完成日期：2017年4月18日大連理工大學DalianUniversityofTechnology萬方數(shù)

2、據(jù)大連理工大學專業(yè)學位碩士學位論文I摘要吐白水軟化病是柞蠶一種重要的病害，通常發(fā)病于遼寧，吉林，黑龍江等天氣寒冷的地區(qū)。柞蠶患病的機率約為30%，在嚴重的地域甚至可以超過70%。研究發(fā)現(xiàn)，柞蠶Iflavirus病毒（ApIV）是柞蠶吐白水軟化病的病原之一，是小RNA病毒科一株單正鏈RNA病毒。小RNA病毒科病毒的3C蛋白酶具有高度保守的活性位點。3C蛋白酶在病毒復制中有前體蛋白切割的功能，且在宿主細胞內(nèi)沒有同源位點，常被選為研制抗小RN

3、A病毒抑制劑的靶標。對3C蛋白酶已經(jīng)進行了長期的大量的研究，但是還沒有針對ApIV3C蛋白酶抑制劑的研究。在本論文中，通過同源建模以及分子動力學的方法構(gòu)建了ApIV3C蛋白酶的三維結(jié)構(gòu)，通過基于分子對接的虛擬篩選，從含3500多個分子的天然產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫中篩選出15個候選化合物，通過體內(nèi)外的病毒抑制實驗，獲得異黃酮類化合物obol，發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗ApIV病毒活性。體內(nèi)實驗結(jié)果表明，隨著obol濃度的升高，其抑制病毒復制率越高，當obol

4、的濃度達到10μgml時，抑制病毒復制率達到80.5%，并且在此濃度下，細胞毒性造成的細胞活性的降低僅為3.42%，細胞毒性低。體內(nèi)實驗通過觀察蠶蛹的顱頂板顏色的變化觀察蠶蛹感染ApIV的情況，結(jié)果表明，陰性對照組蠶蛹的顱頂板呈白色，陽性對照組蠶蛹的顱頂板呈黑色，不同劑量obol處理注射ApIV病毒的蠶蛹，隨著注射的obol的劑量的升高，顱頂板的顏色逐漸變淺，體內(nèi)實驗驗證了obol有抗ApIV病毒活性。從而發(fā)現(xiàn)了一個ApIV3C蛋白酶的

5、先導化合物。研究了阿維鏈霉菌NRRL8165的搖瓶發(fā)酵條件后，利用該菌株通過生物轉(zhuǎn)化獲得了obol。在動力學模擬與分子對接水平上研究了obol與ApIV3C蛋白酶的相互作用模式，結(jié)果表明obol穩(wěn)定地結(jié)合于ApIV3C蛋白酶的結(jié)合口袋處。從而發(fā)現(xiàn)了一個新的ApIV3C蛋白酶的抑制劑。對obol運用DiscoveryStudio(DS)中的基于反應的原位生長進行修飾，共得到6個化合物，使用分子動力學模擬（Moleculardynamics