石榴中類單寧的分離純化、結(jié)構(gòu)及活性研究.pdf

1、單寧是廣泛存在于植物中的一大類多酚化合物,是近年來不斷研究開發(fā)的一種極強(qiáng)的體內(nèi)活性功能因子。許多研究表明,單寧具有較強(qiáng)的抗氧化能力和較好的藥理活性,目前國內(nèi)外正將其廣泛應(yīng)用于保健品、藥品和化妝品等領(lǐng)域。由于單寧結(jié)構(gòu)復(fù)雜,人工合成不易,國內(nèi)外主要從含有單寧的天然植物如五倍子中提取。因?yàn)樘烊毁Y源有限,導(dǎo)致國內(nèi)外市場單寧價(jià)格迅速上漲,因此從其它富含單寧的植物中提取單寧有一定實(shí)際應(yīng)用意義。
　　 石榴營養(yǎng)十分豐富,其蛋白質(zhì)含量高、氨基酸

2、種類齊全、礦物質(zhì)元素豐富,并含有一定量的有機(jī)酸,同時(shí)還含有少量的原花青素、花色素及黃酮類物質(zhì),對滿足人體的需要都是非常重要的,但目前對石榴中單寧的深入研究卻鮮有報(bào)道。經(jīng)檢測,石榴果實(shí)各部位(包括石榴皮、汁、籽)均有含有豐富的單寧類物質(zhì)(10％～21％),可以作為單寧提取的天然資源加以開發(fā)。本課題旨在對不同品種石榴果實(shí)的不同部位(皮、汁、籽)中單寧的提取、分離純化,結(jié)構(gòu)鑒定、抗氧化性及抑菌效果作出研究,希望對石榴的進(jìn)一步開發(fā)利用起到一定的

3、推動(dòng)作用。
　　 本課題主要研究結(jié)果如下:
　　 1.首先分別測定了3個(gè)不同品種新鮮石榴的果皮、果汁、籽粒中總酚、單寧、原花青素、花色素及總黃酮的含量,結(jié)果表明陜西臨潼酸石榴、大紅袍石榴、三白石榴的皮、汁、籽中單寧含量均較高,很有研究意義,因此確定為實(shí)驗(yàn)材料。
　　 2.對石榴皮中單寧的提取工藝進(jìn)行了初步探討,采用水提的方法,通過單因素實(shí)驗(yàn),和正交實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,分析得出了提取石榴皮單寧的最佳工藝條件:提取溫度10

4、0℃、提取時(shí)間1h、料液比1:20、pH=7、添加0.5％NaHSO3、提取3次。在此最佳工藝組合下石榴皮單寧的平均提取率可達(dá)90％。另外,對于石榴籽中單寧的提取采用脫脂后丙酮浸提的方法,而對石榴果汁中單寧的提取只需榨汁后離心除雜即可。
　　 3.采用固相萃取的方法,用大孔樹脂吸附對3個(gè)品種石榴不同部位的單寧粗提物進(jìn)行了純化,分別得到9種石榴單寧(pomegranate tannin extracts,簡稱PTEs)提取物,作為

5、下一步研究的對象。
　　 4.采用HPLC及LC/MS等手段對酸石榴皮單寧提取物(Extract of sourpomegranate peel tannin,簡稱為SPTE)的結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)行了深入研究,結(jié)果表明SPTE中富含石榴苷(m/z=1083)、石榴林(m/z=781)及鞣花酸(m/z=301)、EA-hexoside(m/z463)及EA-rhamnoside(m/z447),另外還推測了5種化合物可能的結(jié)構(gòu)及裂解途徑:

6、化合物1(m/z=799)經(jīng)推測可能為石榴林與水的聚合物,也可能為石榴亭A;化合物2(m/z783),雙六羥基聯(lián)苯二酰基葡萄糖甙；化合物3(m/z633),鞣料云實(shí)素；化合物4(m/z541),HHDP-葡萄糖-5,6-二羧酸；化合物5(m/z951),石榴亭B。
　　 5.采用化學(xué)發(fā)光法對9種PTEs的體外抗氧化性能做出評價(jià)。結(jié)果表明,在4個(gè)不同的化學(xué)發(fā)光體系中PTEs體現(xiàn)了很好的清除(O)、·OH和H2O2的能力以及對DNA

7、損傷的保護(hù)作用。其中,大紅袍石榴皮單寧提取物具有最好的清除超氧陰離子的作用,而大紅袍品種的石榴籽單寧提取物的效果最差；三白石榴籽單寧提取物對羥基自由基的清除作用最明顯；在雙氧水體系中,三白石榴皮單寧提取物對化學(xué)發(fā)光具有最低的半數(shù)抑制濃度,因此對雙氧水的清除效果最佳；而三白石榴籽單寧提取物對DNA的損傷具有最好的保護(hù)作用。
　　 6.采用紙片法對9種PTEs的抑菌能力進(jìn)行了研究:PTEs在0.04 mg/mL濃度下對金黃色葡萄球菌