中華鱟活性物質(zhì)的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及活性研究.pdf

1、豐富的海洋生物是新型抗腫瘤活性物質(zhì)的重要來源。近年來，已從海洋生物中分離和鑒定出了許多具有抗腫瘤活性的天然物質(zhì)，顯示出誘人的研究開發(fā)前景。鱟是一種古老的海洋動(dòng)物，生活了4億多年，被稱作是“活化石”，其體內(nèi)含有特殊的活性物質(zhì)。世界上僅存四種鱟，美洲鱟、蝎鱟、巨鱟與中華鱟。分布在我國海域的鱟稱作中華鱟。我國中華鱟資源豐富，占世界上鱟資源的98％。本研究對中華鱟進(jìn)行活性物質(zhì)的分離純化、鑒定及活性分析，其主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)對

2、中華鱟進(jìn)行部位分割，分為鱟殼、鱟腳、鱟內(nèi)臟、鱟尾4個(gè)部分。分別用甲醇進(jìn)行萃取，得到四個(gè)部位的粗提物，采用高效液相色譜技術(shù)(HPLC)，對這四個(gè)部位進(jìn)行化學(xué)成分的分析。確定最佳色譜條件為紫外檢測波長220 nm，上樣濃度為1 mg/mL，流速為0.2 mL/min，流動(dòng)相為乙腈-0.1％甲酸超純水溶液。相似度分析顯示，鱟尾與鱟殼、鱟腳、鱟內(nèi)臟的化學(xué)成分相似度在60％以下。在流動(dòng)相為60％的乙腈水-95％的乙腈水條件下，鱟尾與其它部位存在大

3、量色譜重合，但流動(dòng)相為100％的乙腈時(shí)，鱟尾與其它部位的色譜差異很大，存在很多其它部位沒有的色譜峰。因此，以化學(xué)成分差異最大的鱟尾作為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行下一步的分離純化。
　　(2)通過凝膠柱層析、中壓反相C18柱層析以及正相硅膠柱層析技術(shù)，從鱟尾的甲醇粗提物中分離純化得到13種化合物。采用NMR核磁共振技術(shù)、ESI-MS電噴霧質(zhì)譜技術(shù)，通過對一維和二維核磁譜譜圖的解析，鑒定化合物最終的結(jié)構(gòu)。鑒定出11種化合物分別為:膽甾醇、亞油酸甲

4、酯、犬尿酸、礦油精、亞油酸、鄰苯二甲酸二辛酯、2-十五烷酮、膽甾醇乙基碳酸酯、甲基丙烯酸月桂酯、膽甾醇苯乙酸酯、N-Cbz-甘氨酸乙酯。
　　(3)對分離得到的11種化合物進(jìn)行MTT細(xì)胞體外活性增殖試驗(yàn)。在24 h細(xì)胞毒性增殖試驗(yàn)中犬尿酸、亞油酸、2-十五烷酮、甲基丙烯酸月桂酯對人的肝癌HepG2細(xì)胞有較好的抑制活性，其中犬尿酸、亞油酸、2-十五烷酮對人的正常LO2細(xì)胞無細(xì)胞毒作用而甲基丙烯酸月桂酯對人的正常LO2細(xì)胞有較強(qiáng)的殺傷

5、作用。對犬尿酸、2-十五烷酮和順鉑進(jìn)行72h細(xì)胞毒性增殖實(shí)驗(yàn)，犬尿酸、2-十五烷酮和順鉑對HepG2細(xì)胞的IC50分別是75.50μg/mL、48.65μg/mL、19.39μg/mL，對LO2細(xì)胞的IC50分別是280.23μg/mL、250.61μg/mL、118.53μg/mL。結(jié)果表明，無論在24 h和72 h條件下，犬尿酸、2-十五烷酮對人的肝癌HepG2細(xì)胞都有較好的抑制活性，并且對人的正常LO2細(xì)胞無細(xì)胞毒作用，甲基丙烯酸