丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧海馬神經(jīng)元脂質(zhì)過氧化物的影響.pdf

1、隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，外科手術(shù)的難度和復(fù)雜程度亦在日益增加，特別是近年來心臟手術(shù)和器官移植手術(shù)的大量開展，使缺血再灌注損傷成為圍術(shù)期各科所關(guān)注的熱點(diǎn)。 圍術(shù)期腦缺血再灌注損傷一直是臨床麻醉與復(fù)蘇所關(guān)注的問題。大量研究已經(jīng)證明腦缺血再灌注損傷是一個(gè)多因素、多機(jī)制、多環(huán)節(jié)的惡性級(jí)聯(lián)過程。氧自由基的產(chǎn)生、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的毒性作用、蛋白酶激活、炎癥反應(yīng)、線粒體功能異常、蛋白合成及基因表達(dá)的變化、細(xì)胞凋亡等都是造成缺血

2、性腦損害的因素。據(jù)國(guó)外報(bào)道，成人體外循環(huán)下心內(nèi)直視手術(shù)后第一周內(nèi)，細(xì)微的神經(jīng)功能異?；蚓駬p傷發(fā)生率可高達(dá)53％，6個(gè)月后部分病人得到改善，但24％的病人仍遺留精神行為減退，其中42％病人甚至持續(xù)5年之久。防止圍術(shù)期腦缺血再灌注損傷已成為急待解決的問題。 在麻醉學(xué)研究領(lǐng)域，已證明吸入麻醉藥異氟醚、靜脈麻醉藥戊巴比妥鈉、咪唑安定、丙泊酚等，均能對(duì)全腦或局灶性腦缺血性損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。靜脈麻醉藥丙泊酚由于其對(duì)腦生理參數(shù)的有利影響，如

3、：劑量相關(guān)性的腦電圖抑制、腦代謝與腦血流成比例的減少、顱內(nèi)壓降低，已成為實(shí)施腦保護(hù)作用的麻醉藥之一，而且丙泊酚在術(shù)前、術(shù)中和術(shù)后都有廣泛的用途，如：各種診斷和治療過程中的鎮(zhèn)靜、術(shù)中麻醉誘導(dǎo)和維持、ICU內(nèi)的應(yīng)用等。 丙泊酚結(jié)構(gòu)上的特殊性使其對(duì)氧化應(yīng)激中自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化、膜結(jié)構(gòu)和流動(dòng)性改變以及細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載等一系列病理生理變化中的許多環(huán)節(jié)均有阻斷作用，丙泊酚的這種抗氧化作用可能是其發(fā)揮腦保護(hù)作用重要機(jī)制之一，但是丙泊酚抗氧

4、化作用是否存在劑量相關(guān)性，是否濃度越高，其腦保護(hù)作用越強(qiáng)，是一個(gè)值得深入研究的課題。 實(shí)驗(yàn)方法 1.海馬神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng) 取妊娠18天的SD大鼠的胎鼠，將其海馬分離出來后，經(jīng)機(jī)械吹打分離成單細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)板上。3小時(shí)細(xì)胞貼壁后換入無血清培養(yǎng)基(DMEM/F12+2％B27)。 2.缺氧模型的建立 除對(duì)照組外，實(shí)驗(yàn)組分別加入相應(yīng)濃度丙泊酚，作用1小時(shí)后將氯化鈷加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，使氯化鈷終濃度為

5、125μmol/L，放入CO2培養(yǎng)箱，作用4小時(shí)誘導(dǎo)海馬神經(jīng)細(xì)胞化學(xué)缺氧。 3.實(shí)驗(yàn)分組 采用完全隨機(jī)化設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)分為4組：C組(對(duì)照組)：?jiǎn)渭兟然捊M；L組(低濃度組)：氯化鈷+丙泊酚(5μg/ml)；M組(中濃度組)：氯化鈷+丙泊酚(10μg/ml)；H組(高濃度組)：氯化鈷+丙泊酚(20μg/ml)。 4.檢測(cè)指標(biāo) 4.1改良硫代巴比妥法測(cè)定丙泊酚預(yù)處理后缺氧海馬神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中的丙二醛(MDA)含

6、量，丙二醛是脂質(zhì)過氧化作用的終末產(chǎn)物，其含量高低可反映脂質(zhì)過氧化反應(yīng)水平。 4.2黃嘌呤氧化酶法測(cè)定丙泊酚預(yù)處理后缺氧海馬神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中的超氧化物歧化酶(SOD)含量，超氧化物歧化酶含量的高低間接反應(yīng)機(jī)體清除自由基的能力。 4.3比色法測(cè)定丙泊酚預(yù)處理后缺氧海馬神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶(LDH)含量，乳酸脫氫酶水平反映出細(xì)胞的損傷程度。 4.4四唑鹽(MTT)比色法測(cè)定丙泊酚預(yù)處理后缺氧海馬神經(jīng)細(xì)胞的存活率

7、。 4.5AnnexinV-FITC測(cè)定丙泊酚預(yù)處理后缺氧海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡比例。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±S)表示，采用方差分析，各組間兩兩比較采用S-N-K過程。以P＜0.05作為差異有顯著性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.不同濃度丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞丙二醛含量的影響與對(duì)照組比較，三種濃度丙泊酚預(yù)處理組細(xì)胞培養(yǎng)液中丙二醛含

8、量減少(P＜0.05)。采用S-N-K過程兩兩比較，3種劑量組之間兩兩不相同(P＜0.05)，與低濃度組比較，中濃度組丙二醛含量減少，高濃度組丙二醛含量增加；與中濃度組比較，高濃度組丙二醛含量增加。 2.不同濃度丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞超氧化物歧化酶含量的影響 與對(duì)照組比較，三種濃度丙泊酚預(yù)處理組細(xì)胞培養(yǎng)液中超氧化物歧化酶含量增加(P＜0.05)。采用S-N-K過程兩兩比較，3種劑量組之間兩兩不相同(P＜0.0

9、5)，與低濃度組比較，中濃度組超氧化物歧化酶含量增加，高濃度組超氧化物歧化酶含量減少；與中濃度組比較，高濃度組超氧化物歧化酶含量減少。 3.不同濃度丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞乳酸脫氫酶漏出的影響 與對(duì)照組比較，三種濃度丙泊酚預(yù)處理組細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶漏出減少(P＜0.05)。采用S-N-K過程兩兩比較，3種劑量組之間兩兩不相同(P＜0.05)，與低濃度組比較，中濃度組、高濃度組乳酸脫氫酶漏出減少；與中濃度組比

10、較，高濃度組乳酸脫氫酶漏出增加。 4、不同濃度丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響 與對(duì)照組比較，三種濃度丙泊酚預(yù)處理組神經(jīng)細(xì)胞存活率增加(P＜0.05)。采用S-N-K過程兩兩比較，3種劑量組之間兩兩不相同(P＜0.05)，與低濃度組比較，中濃度組、高濃度組細(xì)胞存活率增加；與中濃度組比較，高濃度組細(xì)胞存活率下降。 5、不同濃度丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的凋亡比例的影響 與對(duì)照組比較，三

11、種濃度丙泊酚預(yù)處理組神經(jīng)細(xì)胞凋亡比例降低(P＜0.05)。采用S-N-K過程兩兩比較，3種劑量組之間兩兩不相同(P＜0.05)，與低濃度組比較，中濃度組、高濃度組細(xì)胞凋亡比例降低；與中濃度組比較，高濃度組細(xì)胞凋亡比例增加。 結(jié)論 丙泊酚預(yù)處理對(duì)缺氧海馬神經(jīng)細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，可以增加細(xì)胞存活率，減少乳酸脫氫酶的漏出，降低細(xì)胞的凋亡比例。該保護(hù)作用具有劑量相關(guān)性，高、中、低三種濃度的丙泊酚均有保護(hù)作用，適中濃度的保護(hù)作用