2-ME對食管癌EC9706細胞系增殖、凋亡及cyclin B1和c-Myc基因表達的影響.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)是17β-雌二醇在體內(nèi)的生理代謝產(chǎn)物,它具有抑制多種腫瘤細胞生長和抗血管生成的活性,但作用機制尚不明確。本文以食管癌EC9706細胞系為對象,研究2-ME對EC9706細胞的生長抑制和誘導凋亡效果,并初步考察其作用機制。
　　 1.2-ME對EC9706細胞增殖及凋亡的影響
　　 EC9706細胞系分別經(jīng)0.1,0.5,1,2,5,10μmol/L,2-M

2、E處理24,48和72h后進行生長抑制分析。MTT法檢測其對EC9706細胞的生長抑制效果,結(jié)果以實驗組細胞存活百分比表示。數(shù)據(jù)顯示,1-10μmol/L2-ME可不同程度抑制EC9706細胞生長,并呈現(xiàn)出一定的時間和劑量依賴性,其中5μmol/L和10μmol/L2-ME處理72h后細胞存活率分別為50.03％和40.33％,2-ME分別處理48h和72h后對EC9706細胞系的IC50分別為5.37μmol/L和4.14μmol/L

3、。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)2-ME作用后細胞出現(xiàn)變圓,皺縮,細胞間隙增大等預示其凋亡的形態(tài)變化。流式細胞術(shù)PI單染法分析細胞周期變化顯示,2-ME可將細胞周期阻滯于G2/M期,用10μmol/L藥物處理24h后細胞G2/M期比例達到98.70％,且S期和G1期比例明顯減少。Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞早期凋亡,結(jié)果顯示:在相同時間內(nèi)隨著藥物濃度的升高,細胞早期和晚期凋亡比例也分別增加,經(jīng)5μmol/L和10μmo

4、l/L2-ME處理24h細胞早期和晚期凋亡比例分別為2.26％和6.41％,9.41％和19.74％,表明2-ME可抑制EC9706細胞的生長,誘導其凋亡,并可誘導該細胞系產(chǎn)生G2/M期阻滯。
　　 2.2-ME對cyclin B1,c-Myc等腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達的影響
　　 該部分采用Trizol法提取2-ME處理前后EC9706細胞總RNA,RT-PCR法檢測細胞中Bcl-2,Bax,cyclin B1,Tp53和

5、c-Myc五種細胞凋亡相關(guān)基因mRNA表達情況。結(jié)果顯示10μmol/L2-ME作用24h可使cyclin B1基因mRNA表達水平上調(diào),而進一步延長作用時間對cyclin B1 mRNA表達無明顯影響；隨著藥物作用時間的延長,c-Myc mRNA表達水平逐漸上調(diào)。實驗結(jié)果表明,2-ME可影響細胞凋亡相關(guān)基因cyclin B1和c-Myc的轉(zhuǎn)錄表達。2-ME可能通過上調(diào)cyclinB1 mRNA的表達,參與細胞周期G2/M期阻滯及抑制細

6、胞增殖；c-MycmRNA表達上調(diào)可能參與了2-ME誘導EC9706細胞系凋亡的過程。
　　 3.2-ME對c-Myc、eyclinB1蛋白表達的影響
　　 實驗采用Western Blot分析了2-ME作用后兩蛋白表達情況,以檢測c-Myc和cyclin B1轉(zhuǎn)錄表達改變是否可最終導致其蛋白表達水平的改變。1-10μmol/L的2-ME作用24h可上調(diào)cyclin B1蛋白表達,采用1μmol/L2-ME分別處理EC9