姜黃素對人食管癌EC9706細胞增殖、侵襲的影響.pdf

1、目的:
　　 本實驗觀察了姜黃素在體外對食管癌細胞系EC9706細胞的作用，研究姜黃素是否對食管癌細胞系EC9706細胞具有增殖抑制作用，及姜黃素對食管癌細胞系EC9706細胞侵襲及增殖的影響，并進一步探討其作用機制，為進一步探索研究姜黃素的抗腫瘤作用打下良好的基礎(chǔ)。
　　 材料與方法:
　　 1、細胞增殖抑制實驗（姜黃素對人食管癌細胞作用的體外實驗研究）采用MTT法，將對數(shù)生長期的EC9706細胞調(diào)整細胞濃度為

2、1.0×105/ml（常規(guī)培養(yǎng)人食管癌細胞系EC9706細胞），待貼壁生長后分為三組：①實驗組：加入姜黃素使終濃度分別為40、80、120、160μmol/L:②陰性對照組：加入RPMI-1640培液；③溶劑對照組：加入0.1％DMSO。每組設(shè)12個復(fù)孔，分別于姜黃素干預(yù)24、48、72h，檢測各組細胞增殖抑制率的差異。
　　 2、ETS1及MMP9mRNA在姜黃素處理前后的表達變化采用RT-PCR檢測常規(guī)培養(yǎng)人食管癌細胞系EC

3、9706細胞，對照組加入RPMI-1640培養(yǎng)液，實驗組加入終濃度為40、80、120、160μmol/L的姜黃素分別作用于細胞48h及72h后，各收集對照組和實驗組3瓶EC9706細胞，用RT-PCR技術(shù)檢測ETS1及MMP9mRNA表達情況。
　　 3、用免疫組織化學(xué)方法檢測姜黃素對食管癌細胞系EC9706細胞ETS1及MMP9蛋白表達的影響。
　　 4、所有試驗數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料率

4、的統(tǒng)計學(xué)分析采用x2檢驗，多組間的比較采用單因素方差分析。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)，當(dāng)P＜0.05時才認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、MTT:結(jié)果表明姜黃素對食管癌EC9706細胞具有增殖抑制作用，且呈濃度及時間依賴性，差異有顯著性（P＜0.05）。姜黃素處理24、48和72小時后的IC50分別為206.3μmol/L，135.3μmol/L和98.4μmol/L。160μmol/L姜黃素作用72小時后

5、，EC9706細胞增殖幾乎停滯。
　　 2、RT-PCR示姜黃素作用過的EC9706細胞Ets-1及MMP9mRNA的表達量隨姜黃素濃度的增加而逐漸降低，同時在120μmol/L的姜黃素作用下，二者的表達量隨著時間的延長而逐漸降低。
　　 3、用姜黃素處理后，EC9706細胞Ets-1、MMP9蛋白的表達量都下降，且兩者之間具有相關(guān)性，相關(guān)性具有統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.721，P＜0.05)
　　 結(jié)論: