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文檔簡介
1、目的:
本實驗觀察了姜黃素在體外對食管癌細胞系EC9706細胞的作用,研究姜黃素是否對食管癌細胞系EC9706細胞具有增殖抑制作用,及姜黃素對食管癌細胞系EC9706細胞侵襲及增殖的影響,并進一步探討其作用機制,為進一步探索研究姜黃素的抗腫瘤作用打下良好的基礎(chǔ)。
材料與方法:
1、細胞增殖抑制實驗(姜黃素對人食管癌細胞作用的體外實驗研究)采用MTT法,將對數(shù)生長期的EC9706細胞調(diào)整細胞濃度為
2、1.0×105/ml(常規(guī)培養(yǎng)人食管癌細胞系EC9706細胞),待貼壁生長后分為三組:①實驗組:加入姜黃素使終濃度分別為40、80、120、160μmol/L:②陰性對照組:加入RPMI-1640培液;③溶劑對照組:加入0.1%DMSO。每組設(shè)12個復(fù)孔,分別于姜黃素干預(yù)24、48、72h,檢測各組細胞增殖抑制率的差異。
2、ETS1及MMP9mRNA在姜黃素處理前后的表達變化采用RT-PCR檢測常規(guī)培養(yǎng)人食管癌細胞系EC
3、9706細胞,對照組加入RPMI-1640培養(yǎng)液,實驗組加入終濃度為40、80、120、160μmol/L的姜黃素分別作用于細胞48h及72h后,各收集對照組和實驗組3瓶EC9706細胞,用RT-PCR技術(shù)檢測ETS1及MMP9mRNA表達情況。
3、用免疫組織化學(xué)方法檢測姜黃素對食管癌細胞系EC9706細胞ETS1及MMP9蛋白表達的影響。
4、所有試驗數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料率
4、的統(tǒng)計學(xué)分析采用x2檢驗,多組間的比較采用單因素方差分析。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn),當(dāng)P<0.05時才認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果:
1、MTT:結(jié)果表明姜黃素對食管癌EC9706細胞具有增殖抑制作用,且呈濃度及時間依賴性,差異有顯著性(P<0.05)。姜黃素處理24、48和72小時后的IC50分別為206.3μmol/L,135.3μmol/L和98.4μmol/L。160μmol/L姜黃素作用72小時后
5、,EC9706細胞增殖幾乎停滯。
2、RT-PCR示姜黃素作用過的EC9706細胞Ets-1及MMP9mRNA的表達量隨姜黃素濃度的增加而逐漸降低,同時在120μmol/L的姜黃素作用下,二者的表達量隨著時間的延長而逐漸降低。
3、用姜黃素處理后,EC9706細胞Ets-1、MMP9蛋白的表達量都下降,且兩者之間具有相關(guān)性,相關(guān)性具有統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.721,P<0.05)
結(jié)論:
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