2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:明確枸杞多糖(LBP)對(duì)糖尿病大鼠血-視網(wǎng)膜屏障的保護(hù)作用,進(jìn)一步探討枸杞多糖通過(guò)調(diào)控ROCK信號(hào)通路及其底物P-MLC的表達(dá),減少血-視網(wǎng)膜屏障滲漏的作用機(jī)制。
   材料與方法:實(shí)驗(yàn)一.取健康雄性SD大鼠60只,隨機(jī)分為3組:CON組:正常對(duì)照組;DM組: STZ造模;LBP組: STZ造模成模后予以LBP(250mg/Kg·d)灌胃,DM組予以等量的生理鹽水灌胃。分別于4w、8w、12w抽取靜脈血,并取眼球。實(shí)驗(yàn)二.

2、健康成年雄性(SD)大鼠54只,分組及給藥方法取材時(shí)間同實(shí)驗(yàn)一,采用HE染色光鏡觀察各組大鼠視網(wǎng)膜各層組織細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)變化。實(shí)驗(yàn)三.健康成年雄性(SD)大鼠44只,隨機(jī)分為5組,CON組、DM組、LBP組給藥方法取材時(shí)間同實(shí)驗(yàn)一,F(xiàn)組:成模后法舒地爾(Fasudil)腹腔注射(15mg/kg),L+F組:成模后LBP灌胃+Fasudil腹腔注射,各組于8w取材。分別用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Occludin、ROCK1表達(dá)情況進(jìn)行半定量分

3、析。實(shí)驗(yàn)四.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞RF/6A,MEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h,按照1:2~1:4進(jìn)行傳代。分組檢測(cè):共分5組,正常對(duì)照組:含葡萄糖5.5mmol/L;高糖1組:含葡萄糖30mmol/L;高糖2組:含葡萄糖40mmol/L;LBP+高糖1組:含葡萄糖30mmol/L+LBP(1g/L);LBP+高糖2組:含葡萄糖40mmol/L+LBP(1g/L);于1d、3d、5d、7d進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。
   結(jié)果:
   1.LBP對(duì)DM

4、大鼠血糖、血脂及血-視網(wǎng)膜屏障滲漏的影響:
   (1)血糖變化:LBP干預(yù)后的各組大鼠對(duì)應(yīng)同時(shí)期的DM大鼠的血糖均有明顯下降,4w時(shí)血糖下降幅度為57%,8w時(shí)下降幅度為40%,12w血糖下降幅度為36%,其降血糖效果以4w最為明顯,隨著病情的進(jìn)展LBP的降糖效果有所減弱,下降率基本穩(wěn)定在35%~40%之間。
   (2)體重的變化:DM組成模后,開始出現(xiàn)消瘦,體重下降或增加緩慢,明顯低于相同時(shí)間段的其他兩組大鼠的體重

5、。而LBP組則體重與正常對(duì)照組比較略有下降,明顯好于DM組。
   (3)血脂的變化:DM組12w時(shí)甘油三酯基本達(dá)到正常值的3倍,而LBP組12w時(shí)甘油三酯的濃度有輕度上升。12w時(shí)DM組總膽固醇濃度是正常對(duì)照組的1.4倍;而LBP組膽固醇濃度與正常組基本無(wú)差異p>0.05。
   (4)EB在血-視網(wǎng)膜屏障滲漏的變化:DM組大鼠EB滲漏量4w、8w、12w分別增加了2.1倍、2.3倍、2.7倍。而枸杞多糖組較糖尿病組以

6、上三個(gè)時(shí)間點(diǎn)EB滲透量降低了50%、40%、27%,組間比較p<0.01。前4w保護(hù)作用表現(xiàn)就的最明顯。
   2.LBP對(duì)DM大鼠血-視網(wǎng)膜屏障形態(tài)學(xué)變化的影響:
   (1)HE染色光鏡觀察:12wDM組神經(jīng)纖維層斷裂明顯;節(jié)細(xì)胞、內(nèi)顆粒層細(xì)胞排列明顯紊亂;毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張,數(shù)量增加。4wLBP組、8wLBP組各層組織形態(tài)與正常組織基本無(wú)明顯差別,12wLBP組僅出現(xiàn)內(nèi)、外顆粒層排列稍有不規(guī)則,毛細(xì)血管的輕度擴(kuò)張。<

7、br>   (2)視網(wǎng)膜血管鋪片:12w DM組毛細(xì)血管網(wǎng)迂曲,扭結(jié),某些部位出現(xiàn)節(jié)段性膨大,管腔狹窄甚至閉塞。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞有所減少;12wCON、DM、LBP組VEGF灰度值216.13±2.71、105.30±4.25、176.72±4.31。組間有明顯差異p<0.05,DM組并隨著病程的進(jìn)展,VEGF表達(dá)的量不斷增高。
   (3)電鏡下超微結(jié)構(gòu)的改變:12w DM組大鼠視網(wǎng)膜基底膜進(jìn)一步增厚,血管內(nèi)皮細(xì)胞及周細(xì)胞腫

8、脹,胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹變性,管腔可出現(xiàn)擴(kuò)張。視桿細(xì)胞膜盤模糊,出現(xiàn)溶解、斷裂,間隙進(jìn)一步擴(kuò)大。12w LBP胞質(zhì)內(nèi)部分線粒體輕度腫脹變性,基底膜增厚不明顯,毛細(xì)血管壁完整,管腔無(wú)擴(kuò)張。視桿細(xì)胞,膜盤結(jié)構(gòu)略有些模糊,結(jié)構(gòu)開始出現(xiàn)紊亂,但紋理尚清。
   3.枸杞多糖對(duì)糖尿病大鼠血-視網(wǎng)膜屏障保護(hù)作用機(jī)理的研究:
   (1)免疫組化法檢測(cè)的Occludin表達(dá):主要分布在視網(wǎng)膜內(nèi)五層上?;叶戎?2w時(shí),CON組143.70±

9、2.29;DM組173.18±3.78;LBP組153.02±3.59,DM組表達(dá)較正常對(duì)照組顯著減少。隨著糖尿病視網(wǎng)膜病變時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降。8w各治療組與DM組比較,Occludin表達(dá)量明顯增加。F+L組效果最好(p<0.05),LBP與Fasudil組之間無(wú)明顯差異(p>0.01)。
   (2)免疫組化法檢測(cè)的ROCK1表達(dá):主要分布在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)顆粒層,灰度值12w時(shí),CON組178.32±5.92;DM組15

10、5.91±2.76;LBP組178.82±4.33,DM組從4w開始減弱,并隨著病程的延長(zhǎng),ROCK1表達(dá)的量逐漸增加,而LBP組ROCK表達(dá)量并沒有明顯的增加。各治療組間比較,F(xiàn)+L組與正常組無(wú)明顯差異(p>0.05),治療效果最好,F(xiàn)asudil組的作用要比LBP的效果明顯一些(p<0.05)。
   (3)免疫印跡法檢測(cè)Occludin蛋白表達(dá):DM組隨著病程的延長(zhǎng),Occludin蛋白的量逐漸下降,組間有明顯差異p<0.

11、01,而LBP組3.57±0.58;F組3.65±0.71;F+L組4.48±0.53,LBP組與F組比較LBP組表達(dá)略低,但無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05。F+L組表達(dá)量高于其他兩治療組p<0.01,與CON組相接近。
   (4)免疫印跡法檢測(cè)ROCK1蛋白表達(dá):各組DM組大鼠ROCK蛋白表達(dá)隨著病程的延長(zhǎng)量逐漸上升,組間有明顯差異p<0.01;而LBP組3.14±0.51;F組3.05±0.42;F+L組2.62±0.51,

12、LBP組與F組比較LBP組表達(dá)略高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p<0.05。F+L組表達(dá)量高于其他兩治療組p<0.01,與CON組相接近。
   (5)免疫印跡法檢測(cè)P-MLC蛋白表達(dá):各組DM組大鼠ROCK蛋白表達(dá)隨著病程的延長(zhǎng)量逐漸上升,組間有明顯差異p<0.01,而LBP組2.97±0.42;F組2.78±0.53;F+L組2.44±0.47,LBP組與F組比較LBP組表達(dá)略高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p>0.05。F+L組表達(dá)量高于其他兩治療組p

13、<0.01,與CON組相接近。
   4.枸杞多糖對(duì)高糖培養(yǎng)下視網(wǎng)膜血管皮細(xì)胞Rho/ROCK信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響:
   (1)正常RF/6A呈單層扁平上皮狀,高糖2組7d組內(nèi)皮細(xì)胞收縮明顯,有的伸出長(zhǎng)長(zhǎng)的偽足,邊界模糊,細(xì)胞間形成明顯的裂隙,細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量明顯較對(duì)照組少。高糖1組則于5d后形態(tài)開始出現(xiàn)變化。而LBP+高糖1組、LBP+高糖2組,僅于7d時(shí),細(xì)胞略有些變圓,細(xì)胞數(shù)量略少。
   (2)RF/6As單

14、層通透性的變化:3、5、7 d高糖組HRP的光密度值明顯高于正常對(duì)照組(p<0.01),尤其高糖2組滲漏更加明顯。而LBP則能逆轉(zhuǎn)這種因高糖造成的滲漏(p<0.01)。尤以LBP+高糖1組效果較理想,與對(duì)應(yīng)的高糖1組通透性明顯降低(p<0.01)。
   (3)F-actin形態(tài)及分布的變化:對(duì)照組F-actin分布均勻,呈網(wǎng)狀有序排列,細(xì)胞相互融合,連接緊密。高糖2組7d外周致密帶明顯斷裂,胞質(zhì)內(nèi)應(yīng)力纖維斷裂,細(xì)胞周邊出現(xiàn)“絨

15、毛狀”短的指狀突起,“空洞狀”裂隙增大,細(xì)胞近似脫落狀態(tài)。LBP+高糖2組7d外周致密帶進(jìn)一步變細(xì),并且部分出現(xiàn)斷裂,細(xì)胞間開始出現(xiàn)裂隙,但細(xì)胞形態(tài)明顯好于高糖7d組。
   (4)ROCK1蛋白表達(dá)量:隨葡萄糖濃度的增加而升高,與β-actin的光密度比值,正常組0.54±0.25、高糖1組0.85±0.31、高糖2組1.32±0.38,高糖1組和高糖2組與對(duì)照組比較p<0.01,而這種增高趨勢(shì)能被LBP所逆轉(zhuǎn),在葡萄糖濃度為

16、30mmol/L的條件下LBP抑制ROCK1表達(dá)的作用更明顯。
   (5)P-MLC蛋白表達(dá)量:表達(dá)量隨葡萄糖濃度的增加而升高,與β-actin的光密度比值,正常組1.34±0.25、高糖1組2.45±0.31、高糖2組3.32±0.38,高糖1組和高糖2組與對(duì)照組比較p<0.01,LBP抑制P-MLC表達(dá)的升高,LBP+高糖1組1.38±0.27,LBP+高糖2組1.87±0.51。
   (6)Occludin蛋白

17、表達(dá)量:隨著葡萄糖濃度的增加Occludin蛋白表達(dá)量逐漸下降,LBP-高糖1組0.90±0.16,LBP-高糖2組0.69±0.14,各治療組均可明顯提升其相對(duì)應(yīng)高糖組Occludin表達(dá)的量,有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p<0.01,尤其LBP-高糖1組可明顯抑制Occludin表達(dá)的量的下降。
   結(jié)論:
   1.LBP可以顯著減低糖尿病大鼠的血糖、血脂并能降低血-視網(wǎng)膜屏障的滲漏。
   2.LBP可以減低糖尿病

18、大鼠的視網(wǎng)膜血管上VEGF的表達(dá),并能減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞的水腫,減少基底膜的增厚,并減輕視細(xì)胞的損害。
   3.DR的過(guò)程中確實(shí)存在著ROCK通路的激活,ROCK及其底物P-MLC表達(dá)的上調(diào)。而該過(guò)程可以被LBP所阻斷,減低以上信號(hào)分子的表達(dá),通過(guò)穩(wěn)定Occludin的表達(dá),起到保護(hù)血-視網(wǎng)膜屏障的作用。
   4.LBP可以明顯減輕體外高糖環(huán)境培養(yǎng)下的單層EC的滲漏,通過(guò)抑制ROCK及其底物P-MLC該信號(hào)通路

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