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1、目的:觀察血管緊張素-(1-7)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)幼年大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響,并探討其是否通過cAMP/PKA通路進(jìn)行介導(dǎo)抗纖維化作用。 方法:⑴細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定:用酶消化法分離細(xì)胞,差速貼壁法純化獲得心室肌成纖維細(xì)胞為材料,用光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定細(xì)胞。⑵檢測(cè)方法:WST-1比色法測(cè)定細(xì)胞增殖情況,放射免疫法測(cè)定Ⅲ型膠原前體序列(PCⅢ)的含量。⑶實(shí)驗(yàn)分組:根據(jù)不同藥物及藥物不同濃度,將實(shí)驗(yàn)共分四
2、部分:①觀察Ang-(1-7)對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的心肌成纖維細(xì)胞是否有影響。共分5組:不同濃度(10-9-10-6M)Ang-(1-7)組和空白對(duì)照組。②觀察Ang-(1-7)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)下對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響。空白對(duì)照組,TGF-β1組,不同濃度的Ang-(1-7)(10-9-10-6mol/L)+TGF-β1組。③H-89對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞的影響??瞻讓?duì)照組,Ang-(1-7)組,H-89組,H-89+Ang-(1-7)組
3、。④H-89對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)下對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響;分5組。空白對(duì)照組,TGF-β1組,TGF-β1組+H-89組,TGF-β1+Ang-(1-7)組,TGF-β1+Ang-(1-7)+H-89組。⑷數(shù)據(jù)處理:用SPSS13.0軟件包;細(xì)胞活度OD值(吸光度)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,單因數(shù)方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,兩兩比較采用LSD法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果:①培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化
4、學(xué)的方法鑒定為心肌成纖維細(xì)胞,純度95%以上。②Ang-(1-7)在基礎(chǔ)狀態(tài)下呈濃度依賴性抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖和PCⅢ的合成。Ang-(1-7)各濃度組(10-9-10-6mol/L)OD值及PCⅢ的合成明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05),OD值及Pcm的合成隨濃度的增加而降低,各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③Ang-(1-7)呈濃度依賴性地抑制TGF-β1的誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原PCⅢ的合成作用。④Ang
5、-(1-7)在cAMP/PKA通路的研究。1)PKA抑制劑H-89能阻斷Ang-(1-7)對(duì)TGF-β1的抑制細(xì)胞增殖和膠原PCⅢ的合成作用,與TGF-β1+ Ang-(1-7)及空白對(duì)照組比較P<0.05,與TGF-β1組比較無明顯差異(P>0.05)。⑤基礎(chǔ)狀態(tài)下,H-89能阻斷Ang-(1-7)對(duì)細(xì)胞增殖和膠原PCⅢ合成抑制作用,與Ang-(1-7)組比較差異明顯P<0.05,與空白組對(duì)照比較無明顯差異。 結(jié)論:⑴Ang-
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