側(cè)腦室注射pLXSN-bcl-2 cDNA對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡、腦梗死體積及bcl-2-bax蛋白表達(dá)影響的動(dòng)態(tài)研究.pdf

1、目的:前言腦缺血以后神經(jīng)細(xì)胞死亡的形式之一即是細(xì)胞凋亡,bcl-2基因(B-celllymphoma/leukemia-2 gene)作為一種抗凋亡基因,在大量研究中證明對(duì)缺血性腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用,bax基因(bcl-2 associated x gene)被認(rèn)為是一種凋亡促進(jìn)基因,與bcl-2共同調(diào)節(jié)凋亡.隨著分子生物學(xué)和基因工程的發(fā)展,基因治療可能為臨床治療腦梗死提供一個(gè)新思路、新方法.目前基因治療腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究多采用病

2、毒載體,多因其安全性難以保障,很難應(yīng)用于臨床.該實(shí)驗(yàn)組此前的研究曾將質(zhì)粒pLXSN介導(dǎo)的人bcl-2基因直接注射于大鼠腦梗死周圍區(qū),即相當(dāng)于缺血半暗帶腦細(xì)胞旁,證明其可以安全、有效的抑制局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡.但由于局部直接注射的轉(zhuǎn)基因方式創(chuàng)傷性大,且不易于使轉(zhuǎn)入的基因在全腦內(nèi)發(fā)揮作用,所以不適于臨床應(yīng)用.為了尋求更加方便、快捷、安全、有效的治療方法,該研究以質(zhì)粒pLXSN作為載體轉(zhuǎn)染人bcl-2 cDNA,經(jīng)側(cè)腦室注入大鼠大腦中

3、動(dòng)脈梗塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,觀察缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)的腦梗死體積、bcl-2/bax蛋白表達(dá)、細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化情況,探討質(zhì)粒pLXSN介導(dǎo)人bcl-2基因在局灶性腦缺血中的腦保護(hù)作用,為臨床治療腦梗死提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法依照常規(guī)的分子生物學(xué)方法鑒定、提取及擴(kuò)增質(zhì)粒pLXSN和質(zhì)粒pLXSN-bcl-2.將180只大鼠均采用Zea-longa線栓法制成大鼠MCAO模型,隨機(jī)分

4、為3組:生理鹽水組(n=60)、空載質(zhì)粒組(n=60)和bcl-2組(n=60).采用立體定位的方式于MCAO后立即經(jīng)側(cè)腦室分別注入生理鹽水、質(zhì)粒pLXSN和質(zhì)粒pLXSN-bcl-20μl.采用TTC染色、免疫組織化學(xué)、原位末端標(biāo)記(TUNEL)法分別觀察并檢測(cè)腦缺血再灌注3h、6h、24h、48h、72h后的腦梗死體積、bcl-2/bax蛋白表達(dá)和神經(jīng)元凋亡狀況.結(jié)論局灶性腦缺血后,經(jīng)側(cè)腦室注入質(zhì)粒pLXSN介導(dǎo)人bcl-2 cDN