二烯丙基三硫?qū)χ嗵钦T導(dǎo)急性肺損傷小鼠肺表面活性蛋白SP-A、SP-B mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：急性肺損傷(acute lung injury，ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)是指心源性以外各種肺內(nèi)外致病因素(嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等)導(dǎo)致的以急性、進(jìn)行性、頑固性低氧血癥為特征的綜合征，后期多并發(fā)多器官功能障礙綜合癥(multiple organ dysfunctionsyndrome，MODS)。ALI和ARDS是性質(zhì)相同的連續(xù)病理生理過(guò)程的不同

2、階段，ALI是ARDS的早期階段。 革蘭氏陰性桿菌內(nèi)毒素是導(dǎo)致ALI/ARDS最常見(jiàn)的原因。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素的主要成份，是動(dòng)物ALI/ARDS模型制備最常用的致傷劑。因此，注射LPS不僅可以成功復(fù)制ALI/ARDS模型，而且可以很好地模擬臨床嚴(yán)重感染引發(fā)的ALI/ARDS。LPS不僅可以引起肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮和肺泡上皮損傷，肺微血管通透性增高，肺水腫及透明膜形成，而且可以

3、引起肺表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant，PS)代謝和功能的異常。肺表面活性蛋白(surfactant proteint，SP)SP-A、SP-B是PS系統(tǒng)的重要組成部分。SP-A和SP-B協(xié)同作用參與肺表面活性物質(zhì)的形成和代謝。其功能及合成、分泌、調(diào)控復(fù)雜，在ALI/ARDS的病理生理機(jī)制中意義重大。 二烯丙基三硫(diallyl trisulfide，DATS)是大蒜提取物主要有效活性成分?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)：

4、大蒜提取物具有廣譜抗菌消炎作用，對(duì)于細(xì)菌及深部真菌感染均有一定的治療效果。朱桂軍等報(bào)道預(yù)防性應(yīng)用DATS可抑制LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺泡巨噬細(xì)胞株MH-S促炎性細(xì)胞因子FNF-α及IL-1β的表達(dá)及生成，而且可使小鼠肺組織NF-κB活性及IκB磷酸化水平明顯下降，這提示DATS可能對(duì)ALI/ARDS具有潛在的防治作用。因此，本研究選用LPS作為致傷劑復(fù)制小鼠ALI動(dòng)物模型，從肺組織病理變化、肺濕/干重比以及SP-A、SP-B mRNA表

5、達(dá)觀察了DATS對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠的預(yù)防作用，以期進(jìn)一步為臨床預(yù)防ALI/ARDS提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇健康昆明小鼠共130只。隨機(jī)分為5組：(1)ALI組，每天腹腔注射與。DATS等體積生理鹽水一次，連續(xù)注射7天后，腹腔注射LPS 10mg/kg；(2)DATS預(yù)防組，每天腹腔注射(2mg/ml)DATS 30mg/kg一次，連續(xù)注射7天后，腹腔注射LPS 10mg/kg；(3)DATS治療組，每天腹腔注射

6、與DATS等體積生理鹽水一次，連續(xù)注射7天后，腹腔注射LPS10mg/kg，之后30min再腹腔注射(2mg/ml)DATS30mg/kg一次；(4)DATS組，每天腹腔注射(2mg/ml)DATS30mg/kg一次，連續(xù)注射7天；(5)生理鹽水對(duì)照組，每天腹腔注射與DATS等體積生理鹽水一次，連續(xù)注射7天。各組動(dòng)物(n=6)均按2h、6h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)脫頸處死，測(cè)定各組肺組織濕/干重比值(wet/dry weight raito，W/D)

7、，評(píng)估肺水腫程度。用反轉(zhuǎn)錄PCR(reveuse transcription PCR，RT-PCR)檢測(cè)各組肺組織SP-A、SP-B mRNA表達(dá)，并用Gel-pro凝膠分析軟件對(duì)RT-PCR產(chǎn)物半定量分析。用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，多組均數(shù)比較行單因素方差分析(ANOVA)，兩兩比較用最小顯著差法(least significant difference，LSD)；各兩組均數(shù)比較

8、行兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(independent samples t Test)，P<0.05為有顯著性差異。各組動(dòng)物(n=2)注射LPS后12h，用HE染色(hematoxylin and eosin stain，HE stain)光鏡下觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果： 1.肺W/D變化ALI組，2h時(shí)肺W/D較對(duì)照組無(wú)明顯變化(P>0.05)，6h時(shí)肺W/D較對(duì)照組顯著升高(P<0.05)，表明出現(xiàn)肺水腫。6h時(shí)，DATS

9、預(yù)防組肺W/D與ALI組相比顯著下降(P<0.05)，但DATS治療組與ALI組相比肺W/D無(wú)明顯改善(P>0.05)。單獨(dú)注射DATS組與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)。 2.肺組織形態(tài)學(xué)變化肺大體觀察，對(duì)照組及DATS組肺外觀均無(wú)明顯異常改變；ALI組肺體積增大，呈暗紅色，散在有大小不一的紅色斑點(diǎn)，切面疏松，有淡紅色液體溢出；DATS預(yù)防組較ALI組病變明顯減輕，但DATS治療組較ALI組無(wú)明顯變化。光鏡觀察肺組織形態(tài)學(xué)改

10、變發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組及DATS組肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡間隔無(wú)水腫，肺泡腔清晰；ALI組肺泡間隔增寬，腔內(nèi)有少許出血、滲出及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺間質(zhì)充血水腫，有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；DATS預(yù)防組肺組織中炎細(xì)胞浸潤(rùn)、滲出及出血等形態(tài)學(xué)變化較ALI組明顯減輕；DATS治療組無(wú)明顯改善。 3.肺組織SP-A、SP-B mRNA表達(dá)注射LPS后2h、6h，ALI組肺組織SP-A mRNA表達(dá)均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；DATS預(yù)防組與ALI組相比

11、，肺組織中SP-A mRNA表達(dá)均升高(p<0.05)，但仍低于對(duì)照組(p<0.05)；DATS治療組肺組織SP-A、SP-B mRNA表達(dá)與ALI組相比均無(wú)明顯差異(p>0.05)；DATS組肺組織SP-A、SP-B mRNA表達(dá)和相應(yīng)的對(duì)照組相比較均無(wú)明顯變化(p>0.05)。同組肺組織內(nèi)SP-A、SP-B各自2h、6h mRNA表達(dá)相比較均無(wú)明顯變化(p>0.05)。 結(jié)論：本研究從肺組織病理改變、肺濕/干重比及SP-A、

12、SP-B mRNA表達(dá)方面研究了DATS對(duì)LPS誘導(dǎo)ALI小鼠的預(yù)防作用，得出以下結(jié)論： 1、預(yù)防性應(yīng)用DATS可減輕LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺水腫程度及肺組織炎癥反應(yīng)； 2、預(yù)防性應(yīng)用DATS可在一定程度上降低LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺組織SP-A、SP-B：mRNA表達(dá)下降的程度。 若能對(duì)嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷等具有發(fā)生ALI傾向的高?；颊哳A(yù)防性應(yīng)用DATS，可能會(huì)在一定程度上起到防止ALI發(fā)生的作用，這對(duì)于提高ALI傾