甲型副傷寒沙門氏菌CMCC 50973外膜蛋白的免疫蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、傷寒是一種急性全身性感染，包括傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)引起的傷寒和甲、乙、丙型副傷寒沙門氏菌(Salmonella paratyphi A，B and C)引起的副傷寒。甲型副傷寒沙門氏菌是甲型副傷寒的病原菌，通過糞一口途徑傳播，感染劑量為10<'3>～10<'9>，人是唯一宿主。人群對甲型副傷寒沙門氏菌普遍易感，但兒童和青壯年發(fā)病最高?，F(xiàn)在據(jù)估計每年全球傷寒(包括副傷寒)患者約2200萬，死亡超過20萬人。自1

2、996年以來，我國的甲型副傷寒的發(fā)病率也在逐年升高。更為嚴重的是，甲型副傷寒沙門氏菌臨床耐藥株以及多重耐藥株(MDR)已經(jīng)相當廣泛，使臨床治療變得更加困難，一些患者由于治療不徹底而成為帶菌者。因此，需要研究出安全、高效、簡便、經(jīng)濟的疫苗來預防甲型副傷寒。 免疫蛋白質(zhì)組學是通過雙向電泳分離病原蛋白質(zhì)組，再用不同病人的超免血清鑒定出有強免疫性的蛋白，這一蛋白質(zhì)組的分支，很有希望成為尋找藥物和疫苗靶位的有效途徑(因為證明這些蛋白能引起

3、宿主的免疫應(yīng)答)。甲型副傷寒沙門氏菌是無莢膜的革蘭氏陰性菌，其外膜蛋白在致病和刺激機體免疫應(yīng)答方面有非常重要的作用。因為細菌的膜蛋白(尤其是外膜蛋白)抗原，往往是一些反應(yīng)性抗原，它們與機體免疫系統(tǒng)有十分密切的相互作用。因此，在疫苗研究中，病原體的表面蛋白具有很重要的地位。 本實驗提取了甲型副傷寒沙門氏菌的外膜蛋白，建立了甲型副傷寒沙門氏菌的外膜蛋白雙向電泳參考圖譜。在考馬斯亮蘭染色的膠上共取了80個外膜蛋白點，鑒定出61個，代表

4、30種蛋白。結(jié)合根據(jù)基因組預測的外膜蛋白對鑒定的所有蛋白質(zhì)點的等電點/分子量吻合程度、分布以及功能分類等進行了初步的分析。進一步采用免疫蛋白質(zhì)組的方法，對提取細菌的外膜蛋白進行雙向電泳分離后，再轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，與甲型副傷寒病人恢復期的血清進行免疫印跡反應(yīng)，記錄具有免疫反應(yīng)的外膜蛋白點。在考馬斯亮蘭染色的膠上取外膜蛋白點以及有免疫反應(yīng)的蛋白點，酶切后進行MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定。在PVDF膜上共有45個免疫反應(yīng)點，鑒定到42個點，代