采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選與重癥肌無力手術(shù)療效相關(guān)的標(biāo)志蛋白.pdf

1、背景:
　　 重癥肌無力(MG)是神經(jīng)—肌肉接頭處傳遞障礙的自身免疫性疾病。目前MG病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，但其發(fā)病和胸腺關(guān)系密切，約70％-80％的MG患者伴胸腺病變，胸腺切除術(shù)可使患者獲得較好的遠(yuǎn)期效果，故胸腺切除是治療MG的重要手段之一。
　　 現(xiàn)在，胸腺切除術(shù)治療重癥肌無力已得到公認(rèn)，其長(zhǎng)期隨訪總有效率可達(dá)80％左右。但仍然有約20％病人療效不理想，術(shù)后甚至病情加重。
　　 手術(shù)對(duì)病人來說是一個(gè)較大的

2、創(chuàng)傷，并且手術(shù)有一定死亡風(fēng)險(xiǎn)和相關(guān)并發(fā)癥，因此手術(shù)指征應(yīng)嚴(yán)格掌握。如果手術(shù)前就能預(yù)測(cè)患者手術(shù)療效，不僅能為MG病人選擇治療方式提供參考，減少病人不必要的痛苦，而且能帶來巨大經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，避免不必要的醫(yī)療消費(fèi)和資源浪費(fèi)。那么，找出影響手術(shù)治療效果的相關(guān)因素就非常有必要。
　　 目前國(guó)內(nèi)外缺少統(tǒng)一的術(shù)前預(yù)測(cè)手術(shù)療效的客觀指標(biāo)，通過臨床特征預(yù)測(cè)，很多結(jié)論不一致。國(guó)內(nèi)有的學(xué)者認(rèn)為年齡，性別，術(shù)前Osserman分型等因素對(duì)手術(shù)療效無影

3、響，有的學(xué)者認(rèn)為有影響；國(guó)外也是這樣。若能進(jìn)一步在分子水平上找出能預(yù)測(cè)手術(shù)療效的相關(guān)分子標(biāo)記物-差異性標(biāo)志蛋白，將能更客觀準(zhǔn)確預(yù)測(cè)手術(shù)療效，手術(shù)指征選擇也更準(zhǔn)確。
　　 本研究組前期利用SELDI-TOF-MS技術(shù)在分子量1000-20000范圍內(nèi)，找到手術(shù)有效組和無效組之間3個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的特異性蛋白峰：M4110-76、M3394-58、M1258-55。并用這3個(gè)特異性蛋白峰構(gòu)建了手術(shù)療效預(yù)測(cè)模型。經(jīng)驗(yàn)證，該模型在對(duì)手術(shù)有

4、效或無效組MG病人分組上，有效組分組準(zhǔn)確率達(dá)87.9％，無效組分組準(zhǔn)確率達(dá)83.3％，總的分組準(zhǔn)確率達(dá)86.3％。但是，這3個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的特異性蛋白峰：M4110-76、M3394-58、M1258-55只是一個(gè)較小的分子量范圍，不是一個(gè)具體的蛋白。并且這三個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的特異性蛋白具體信息并未明確了解，例如它的序列，肽段，具體性質(zhì)和臨床特征等。而且SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)費(fèi)用高，耗時(shí)長(zhǎng)，不適合應(yīng)用于單個(gè)病人檢測(cè)。但是，它提示

5、在手術(shù)治療重癥肌無力患者中療效有效和無效病人血清中存在有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相關(guān)差異性標(biāo)志蛋白，因此明確差異性蛋白的具體性質(zhì)有較大的臨床意義。
　　 目的:
　　 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出重癥肌無力行胸腺擴(kuò)大切除術(shù)后有效患者和無效患者術(shù)前血清中蛋白質(zhì)組表達(dá)差異，找出影響手術(shù)療效的相關(guān)差異蛋白，以指導(dǎo)臨床手術(shù)指征的選擇。
　　 方法:
　　 術(shù)前收集14例重癥肌無力行胸腺擴(kuò)大切除患者血液標(biāo)本，按術(shù)后6個(gè)月療效有效或

6、無效分成有效組和無效組，每組7例。所有病人均經(jīng)新斯的明試驗(yàn)、AChR-Ab檢測(cè)和單纖維肌電圖等診斷為重癥肌無力。在術(shù)后6個(gè)月對(duì)入組病人進(jìn)行隨訪，根據(jù)病人癥狀的改善和服藥情況分為有效組、無效組。在一定條件下，采用雙向凝膠電泳(2-DE)分離有效組和無效組血清總蛋白質(zhì)，比較兩組血清蛋白質(zhì)組表達(dá)差異，對(duì)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)用MALDI-TOF和電噴霧離子阱質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果:
　　 ①采用窄范圍的pH4～7 IPG膠條進(jìn)行2-

7、DE分析，二組蛋白質(zhì)點(diǎn)的總體分布模式非常相似，無效和有效組蛋白膠圖上分別平均顯示197和168個(gè)點(diǎn)。兩組膠蛋白點(diǎn)平均匹配百分率為73.0％。②應(yīng)用相關(guān)統(tǒng)計(jì)軟件分別在膠圖上共選取8個(gè)表達(dá)水平存在明顯差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，鑒定出6個(gè)差異蛋白。其中5個(gè)在無效組中高表達(dá)，對(duì)應(yīng)的點(diǎn)在有效組中低表達(dá)；1個(gè)在有效組高表達(dá)，在無效組中低表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 重癥肌無力行胸腺擴(kuò)大切除術(shù)后有效患者和無效患者蛋白質(zhì)組表達(dá)存在差異。