薄芝糖肽注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法的研究.pdf

1、目的:多糖及多肽類的大分子藥物受到人們?cè)絹碓蕉嗟难芯亢完P(guān)注，然而其質(zhì)量控制還處于比較低的水平，現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能全面的反映和控制藥品的質(zhì)量。本課題選取薄芝糖肽注射液作為研究對(duì)象，對(duì)其成分及結(jié)構(gòu)組成進(jìn)行相關(guān)研究，為這種藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供相關(guān)研究基礎(chǔ)，也可以為這類藥物的進(jìn)一步研究開發(fā)和質(zhì)量控制提供參考。
　　方法:本課題主要對(duì)薄芝糖肽注射液進(jìn)行了以下幾方面的研究。
　　1.采用離子色譜法對(duì)薄芝糖肽注射液的單糖組成及游離糖進(jìn)行

2、研究。以CarboPac PA10(4×250mm)為分析柱，CarboPac PA10(4×50mm)為保護(hù)柱;淋洗液經(jīng)過優(yōu)化后采用28mmol/L KOH溶液（淋洗液發(fā)生器自動(dòng)生成，充氮?dú)獗Ｗo(hù)），在流速0.8mL/min，柱溫30℃的條件下進(jìn)行測(cè)定，安培檢測(cè)器采用積分脈沖檢測(cè)。
　　2.采用一些簡單的化學(xué)方法和波譜方法對(duì)薄芝糖肽注射液的成分及可能的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。用硫酸蒽酮法和硫酸苯酚法測(cè)定多糖的含量;福林酚法測(cè)定多肽的含量;借

3、助紫外分光光度計(jì)，通過β-消除反應(yīng)判斷糖肽的連接方式，以及高碘酸氧化判斷糖苷鍵的類型。
　　3.建立柱前AQC衍生-高效液相色譜法測(cè)定薄芝糖肽注射液里水解之后的氨基酸和游離氨基酸的方法。內(nèi)標(biāo)選用α-氨基丁酸，柱前衍生化試劑選用6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯(AQC)，色譜柱使用Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，緩沖液選用140mmol/L乙酸銨(pH5.00)和60％乙腈溶液為流動(dòng)相，按照一

4、定的梯度進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長選用248nm。
　　4.建立薄芝糖肽注射液的高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜。色譜柱選擇XBridgeTM C18（4.6mm×250mm，5μm），水溶液作為流動(dòng)相A，乙腈溶液作為流動(dòng)相B，按照一定的梯度進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長選用210nm，柱溫采用30℃，進(jìn)樣量為20μL，流速選擇1.0mL/min。
　　按照標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算不同批次的薄芝糖肽注射液之間的相似度。
　　結(jié)果:
　　1.在建立的

5、離子色譜條件下，兩種糖醇和六種單糖組分可以獲得較好分離，且薄芝糖肽注射液中含有甘露醇、葡萄糖，少量的鼠李糖、阿拉伯糖以及微量的巖藻糖。
　　2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，薄芝糖肽注射液中多糖含量為1.23～2.38mg/mL，多肽含量為0.17～0.31mg/mL，糖肽的連接方式為O-型糖肽鍵，糖苷鍵的類型為1→2和1→6糖苷鍵。
　　3.用建立的柱前衍生-高效液相色譜法測(cè)定了薄芝糖肽注射液中17種游離氨基酸和水解后氨基酸的含量。

6、>　　4.薄芝糖肽注射液的HPLC指紋圖譜標(biāo)示出7個(gè)共有峰，結(jié)果顯示，10批被測(cè)樣品的色譜指紋圖譜的整體相似度在0.954以上。
　　結(jié)論:建立的測(cè)定單糖組成的離子色譜法專屬性好，靈敏度高，適合于薄芝糖肽注射液中的單糖組成測(cè)定。薄芝糖肽化學(xué)成分測(cè)定研究，有助于深入開展薄芝糖肽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和提高質(zhì)量控制水平。建立的柱前衍生色譜法能夠很好的分離與測(cè)定18種常見氨基酸，建立的方法符合方法學(xué)驗(yàn)證要求，適用于薄芝糖肽注射液中的氨基酸定量測(cè)定