黃色素在LDL所致視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜復(fù)合體損傷中的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:黃色素是人類黃斑色素的主要組成部分，在抵抗外界損傷維持正常視功能方面發(fā)揮著重要作用。低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein，LDL）及氧化低密度脂蛋白(oxidizedLDL，ox-LDL)可損傷視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)凋亡及誘導(dǎo)視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜層復(fù)合體的早期年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD）樣病理改變。本研究主要探究黃色素在LDL和oxLDL對視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜組織及RPE細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用及機制。
　　方法:1.

2、21只健康雄性SD大鼠分為三組，空白組、LDL組（連續(xù)7天尾靜脈注射LDL4mg/kg）、黃色素組（連續(xù)7天尾靜脈注射LDL+腹腔內(nèi)注射0.2mg/kg黃色素），采用視網(wǎng)膜電流圖觀察大鼠的視網(wǎng)膜功能;TUNEL檢測視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡;透射電鏡觀察視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜復(fù)合體的超微結(jié)構(gòu);ELISA法檢測血清中LDL、HDL、甘油三酯、膽固醇、oxLDL及CRP含量。2.RPE細(xì)胞在不同濃度的黃色素(0-15μM)培養(yǎng)24小時，LDL及oxLDL(10

3、0mg/L)培養(yǎng)24小時，共48小時后TUNEL及流式細(xì)胞法檢測凋亡;3.RPE細(xì)胞培養(yǎng)48小時后，ELISA法檢測細(xì)胞上清液中MCP-1、IL-8因子表達(dá);4.RPE細(xì)胞培養(yǎng)48小時后提取細(xì)胞總蛋白采用WesternBlot法檢測bax、bcl-2表達(dá)。
　　結(jié)果:1.石蠟切片TUNEL檢測顯示黃色素組視網(wǎng)膜外核層細(xì)胞凋亡明顯減少;電鏡示黃色素組大鼠Bruch's膜增厚較LDL組明顯改善，視網(wǎng)膜外核層細(xì)胞凋亡少;ERG結(jié)果顯示三

4、組的a，b波振幅（μv）分別為134.78±11.88，64.32±8.98，110.62±12.86（與LDL組相比p＜0.001）;314.88±25.69，145.13±25.38，257.07±29.79(與LDL組相比p＜0.001)，黃色素組明顯改善LDL組引起的a、b波水平下降;2.血清oxLDL水平（mU/L）分別為18.95±3.17，36.13±1.31(p＜0.001versus對照組)，24.91±7.83(p＜

5、0.001versusLDL組），;血清CRP水平(mU/L)分別為1901.00±253.50，2049.89±154.96，1937.14±48.68(p=0.054versusLDL組);血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平(mmol/L)分別為1.254±0.391、1.370±0.221、1.146±0.272;0.416±0.143、0.521±0.145、0.369±0.092（p＜0.05v

6、ersusLDLgroup）;0.648±0.162、0.687±0.087、0.567±0.110;0.292±0.131、0.310±0.095、0.241±0.071。3.RPE細(xì)胞培養(yǎng)48小時后，LDL組可見明顯黃染細(xì)胞，而黃色素組TUNEL黃染細(xì)胞較少;4.RPE細(xì)胞培養(yǎng)48小時后，LDL及oxLDL組bax表達(dá)量增加而bcl-2表達(dá)量降低，黃色素組對oxLDL引起的bax及bcl-2的表達(dá)量變化明顯改善，且促進(jìn)兩者的表達(dá)結(jié)果

7、;5.LDL及oxLDL顯著誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞分泌MCP-1及IL-8，而黃色素預(yù)處理組明顯降低RPE細(xì)胞MCP-1及IL-8的分泌量。
　　結(jié)論:
　　1.黃色素可明顯降低高循環(huán)LDL對大鼠視網(wǎng)膜-Bruch膜-脈絡(luò)膜復(fù)合體的損傷;
　　2.黃色素在一定程度上可以抑制oxLDL生成，普遍降低大鼠血脂水平，顯著降低血清甘油三酯含量;
　　3.黃色素可減少oxLDL引起的RPE細(xì)胞的凋亡;
　　4.黃色素