SnoN蛋白在肝纖維化大鼠肝組織中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：
　　Smad核轉(zhuǎn)錄共抑制因子(SnoN)作為一種拮抗劑可調(diào)控轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1/Smad(TGF-β1/Smad)信號(hào)的活性，從而保證在正常生理?xiàng)l件下TGF-β1/Smad信號(hào)輸出的穩(wěn)定性。目前已有研究表明SnoN蛋白可以拮抗TGF-β1所致的腎纖維化作用。而在肝纖維化進(jìn)展中，SnoN蛋白是否具有同樣的作用，尚未見報(bào)告，本文通過(guò)觀察SnoN蛋白、TGF-β1、Smurf2等在大鼠肝纖維化進(jìn)展中的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，研究其與肝纖維

2、化發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　方法：
　　本課題采用二甲基亞硝銨（DMN）腹腔注射的方法制備大鼠肝纖維化模型，用同周齡的SD大鼠作為空白對(duì)照。在造模第2，4，6，8周末處死大鼠，動(dòng)態(tài)觀察大鼠肝臟內(nèi)SnoN、Smurf2、TGF-β1及COL-Ⅰ的含量變化，HE染色和MASSON氏三色染色進(jìn)行肝臟病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果：
　　1.各實(shí)驗(yàn)組肝臟組織病理學(xué)變化
　　1.1形態(tài)學(xué)觀察
　　末期處理剖取大鼠肝臟前，先

3、對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物肝臟進(jìn)行大體觀察，觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常2、4、6、8周組大鼠肝臟顏色深紅，表面光滑，質(zhì)地較軟。模型2、4、6、8周組大鼠肝臟均較同齡空白組增大，顏色變淺，多為灰黃色。
　　1.2組織HE染色結(jié)果
　　正常對(duì)照2、4、6、8周組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清楚完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心向周圍呈放射狀排列，肝竇清晰可見，小葉間無(wú)纖維增生，僅匯管區(qū)和中央靜脈血管壁有少量纖維組織，匯管區(qū)小葉間動(dòng)脈、靜脈和小葉間膽管未見擴(kuò)張、增生，未見肝細(xì)

4、胞變性、壞死。與同齡空白組相比，模型2周組大鼠肝細(xì)胞腫脹，排列尚整齊，胞漿疏松，細(xì)胞核位于中央，肝竇狹窄，為肝細(xì)胞水泡變性，肝小葉周圍纖維組織增生，血管稍擴(kuò)張。模型4周組大鼠肝細(xì)胞濁腫，肝竇間可見少量紅細(xì)胞淤積，肝小葉周圍纖維組織明顯增生。模型6周組大鼠肝細(xì)胞濁腫，散見大泡性或小泡性脂肪變性，匯管區(qū)淋巴細(xì)胞核單核細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)出現(xiàn)明顯纖維增生。模型8周組大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性，匯管區(qū)增寬，出現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉周圍及肝

5、細(xì)胞間纖維組織增生，形成粗大纖維網(wǎng)格，包繞肝細(xì)胞團(tuán)塊。HE染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，本課題中的大鼠肝纖維化模型制作成功，模型組大鼠肝纖維化程度隨著時(shí)間的推移逐漸加重。
　　1.3組織MASSON氏三色染色結(jié)果
　　正常對(duì)照2周組大鼠肝臟內(nèi)未見明顯膠原纖維沉積和膠原網(wǎng)絡(luò)，僅匯管區(qū)和中央靜脈血管壁有少量膠原纖維。與空白組相比，模型2周組大鼠肝臟內(nèi)血管周圍可見藍(lán)色膠原纖維，纖維較細(xì)且短，未見膠原網(wǎng)格，即輕度纖維化。模型4周組大鼠肝臟內(nèi)匯管

6、區(qū)和血管周圍膠原纖維增多尤為明顯。模型6周組大鼠肝臟內(nèi)可見較多粗而長(zhǎng)的藍(lán)色膠原纖維伸入肝小葉。模型8周組大鼠肝組織膠原纖維明顯增多，呈放射狀向肝實(shí)質(zhì)延伸，相互連接成纖維網(wǎng)格。MASSON染色結(jié)果提示，模型組大鼠肝臟內(nèi)膠原纖維沉積進(jìn)行性加重。
　　2.肝組織SnoN、Smurf2、TGF-β1和COL-ⅠmRNA動(dòng)態(tài)表達(dá)結(jié)果
　　由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與空白2周組比，模型組大鼠肝臟TGF-β1和COL-Ⅰ的表達(dá)水平呈逐步增高趨勢(shì)，在

7、第6周時(shí)均稍有降低;Smurf2的表達(dá)水平在第2-6周呈增高趨勢(shì)，第8周急劇下降，與空白組相比均具有顯著差別，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。SnoN表達(dá)呈逐步降低趨勢(shì)，從4周以后模型組與對(duì)照組相比均具有顯著差別，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。
　　3.各試驗(yàn)組大鼠肝功能結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，空白2、4、6、8周動(dòng)物肝臟內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(

8、TBil)的含量穩(wěn)定，未見明顯變化。與空白組相比，DMN造模后大鼠肝臟內(nèi)ALT、AST和TBil含量明顯升高，ALB的含量明顯降低，與同齡空白組相比具有明顯的差別，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠造模2周后肝功能已經(jīng)開始出現(xiàn)明顯異常，一直持續(xù)至第8周。
　　模型組第4、6、8周肝纖維化明顯;血清ALT、AGT、Tbil升高，4周時(shí)達(dá)高峰;Alb逐步下降，6周時(shí)最低，各時(shí)間點(diǎn)與同齡對(duì)照組比較均有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)差異(P＜0.01或P＜0.005)。模型組大鼠肝組織內(nèi)SnoN表達(dá)進(jìn)行性降低，第8周達(dá)到最低;Smurf2表達(dá)量逐漸增加，在第6達(dá)最高峰，且明顯高于對(duì)照組，在第8周時(shí)急劇下降; TGF-β1表達(dá)水平逐步增高，在第6周時(shí)略低于第4周和第8周，各模型組與同齡對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01或P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.SnoN蛋白隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)明顯減少，而TGF-β1則隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增多，表明肝臟