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1、目的:通過(guò)研究復(fù)方中藥肝復(fù)康對(duì)大鼠纖維化肝組織A-raf、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)表達(dá)的影響,探討其在A-raf、ERK介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上治療肝纖維化的機(jī)制。 方法:健康SD大鼠,體重180-220克,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C)、模型組(M)、模型對(duì)照組(MC)、低劑量治療組(LT)、中劑量治療組(MT)、高劑量治療組(HT)及中藥中劑量預(yù)防組(P)
2、。皮下注射10%CCl4十二周制備肝纖維化模型,在第九周時(shí)給予中藥肝復(fù)康治療至第二十周。中劑量預(yù)防組在造模的同時(shí)給予中藥中劑量治療。治療結(jié)束后處理動(dòng)物。通過(guò)測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate Aminotransferase,AST)、白蛋白和總蛋白的含量及光鏡下觀察肝組織HE染色來(lái)反映肝纖維化的程度,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝組織中ERK2的表達(dá)及分布,逆轉(zhuǎn)錄聚
3、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)A-raf、ERK2的表達(dá)。 結(jié)果: (1)血清學(xué)指標(biāo):第20周時(shí),中劑量組大鼠血清ALT為37.62±8.941U,AST為50.02±13.68 IU,白蛋白為39.28±2.38 g/L,球蛋白為25.16±3.45g/L,白球比為1.59±0.38;模型組大鼠血清ALT為76.53±10.82IU,AST為85.64±10.62IU,白蛋白為28.46±5.42 g/L,球蛋白
4、為32.53±3.94g/L,白球比為0.96±0.29。 (2)肝組織病理學(xué)變化:HE染色顯示,模型組大鼠肝組織中有較多假小葉形成,中劑量治療組大鼠肝組織中假小葉形成較模型組明顯減輕。免疫組織化學(xué)染色顯示,模型組ERK2的表達(dá)較正常組明顯增強(qiáng),中劑量治療組ERK2的表達(dá)較模型組明顯減輕(P<0.01)。 (3)肝組織A-raf和ERK2mRNA的表達(dá):在逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中,模型組的A-raf、ERK2的表達(dá)較正常組
5、明顯上調(diào)(P<0.01),低、中、高劑量組A-raf、ERK2的表達(dá)較模型組有所下調(diào),其中以中劑量組下調(diào)最為明顯(P<0.01)。中劑量預(yù)防組A-raf、ERK2的表達(dá)與模型組無(wú)明顯差異。 結(jié)論: (1)ERK介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能在肝纖維化的發(fā)病中起重要的作用。 (2)肝復(fù)康對(duì)肝纖維化有明確的治療作用,其抗纖維化的作用機(jī)制可能與ERK介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。 (3)肝復(fù)康中劑量治療組的治療效果較好,是合
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