轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2在肝纖維化大鼠肝組織中表達(dá)的研究.pdf

1、目的：觀察CCl4致大鼠肝纖維化發(fā)生過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2的表達(dá)變化,探討轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2在大鼠肝纖維化發(fā)病機(jī)制中可能的作用。
　　方法：雄性Wistar大鼠32只,隨機(jī)分為正常對(duì)照4周組、正常對(duì)照8周組、肝纖維化4周組和肝纖維化8周組。大鼠肝纖維化模型制備采用皮下注射60％四氯化碳(CCl4)方法進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定肝臟指數(shù)及血清谷丙、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)含量,觀察肝組織纖維化程度,免疫組化SABC法

2、檢測(cè)肝組織中轉(zhuǎn)錄因子ZEB1、ZEB2和a-SMA的表達(dá)情況,并用Realtime-PCR檢測(cè)肝組織中ZEB1、ZEB2mRNA和E-鈣黏蛋白mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：肝纖維化4周組、8周組大鼠的肝臟指數(shù)、血清ALT、AST含量明顯高于相應(yīng)正常對(duì)照組大鼠(P<0.01);病理學(xué)檢查顯示肝纖維化組大鼠肝臟纖維結(jié)締組織明顯增多,且肝纖維化8周組大鼠肝臟纖維化程度較4周組嚴(yán)重,有假小葉形成;免疫組化顯示肝纖維化4周、8周組大鼠肝組

3、織中ZEB1和ZEB2主要表達(dá)在肝細(xì)胞的胞漿中,表達(dá)量均較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著增加(P<0.01),且肝纖維化8周組大鼠肝臟ZEB1和ZEB2表達(dá)量較肝纖維化4周組有顯著增加(P<0.01);肝纖維化4周、8周組大鼠肝組織中a-SMA主要表達(dá)在纖維間隔和鄰近的肝細(xì)胞胞漿中,表達(dá)量較相應(yīng)正常對(duì)照組顯著增加(P<0.01),且肝纖維化8周組大鼠肝臟a-SMA表達(dá)量較肝纖維化4周組也有顯著增加(P<0.01)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示肝纖維化4

4、周和8周組大鼠肝組織ZEB1和ZEB2mRNA表達(dá)量顯著高于相應(yīng)4周和8周正常對(duì)照組(P<0.01),ZEB1和ZEB2mRNA在肝纖維化8周組大鼠肝臟的表達(dá)量較肝纖維化4周組略有降低,但二者相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);同時(shí)肝纖維化4周和8周組大鼠肝組織E-cadherin的mRNA表達(dá)量顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05),且肝纖維化8周組大鼠肝臟E-cadherinmRNA的表達(dá)量較肝纖維化4周組進(jìn)一步下降(P<0.05)。

5、r>　　結(jié)論：肝細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2蛋白及基因表達(dá)水平在CCl4誘導(dǎo)肝纖維化發(fā)生過(guò)程中顯著增加,提示轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2可能參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展;本研究還發(fā)現(xiàn)纖維化大鼠肝臟上皮細(xì)胞特征蛋白E-cadherinmRNA表達(dá)顯著減少,同時(shí)間質(zhì)細(xì)胞特征蛋白a-SMA在纖維間隔和部分肝細(xì)胞內(nèi)表達(dá)顯著增多,提示在大鼠肝纖維化發(fā)生過(guò)程中有部分肝細(xì)胞發(fā)生了EMT轉(zhuǎn)變;我們認(rèn)為可能是轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2表達(dá)上調(diào)通過(guò)抑制其下游靶