轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2在肝纖維化大鼠肝組織中表達的研究.pdf

1、目的：觀察CCl4致大鼠肝纖維化發(fā)生過程中轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2的表達變化,探討轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2在大鼠肝纖維化發(fā)病機制中可能的作用。
　　方法：雄性Wistar大鼠32只,隨機分為正常對照4周組、正常對照8周組、肝纖維化4周組和肝纖維化8周組。大鼠肝纖維化模型制備采用皮下注射60％四氯化碳(CCl4)方法進行。實驗結(jié)束時測定肝臟指數(shù)及血清谷丙、谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)含量,觀察肝組織纖維化程度,免疫組化SABC法

2、檢測肝組織中轉(zhuǎn)錄因子ZEB1、ZEB2和a-SMA的表達情況,并用Realtime-PCR檢測肝組織中ZEB1、ZEB2mRNA和E-鈣黏蛋白mRNA的表達變化。
　　結(jié)果：肝纖維化4周組、8周組大鼠的肝臟指數(shù)、血清ALT、AST含量明顯高于相應(yīng)正常對照組大鼠(P<0.01);病理學檢查顯示肝纖維化組大鼠肝臟纖維結(jié)締組織明顯增多,且肝纖維化8周組大鼠肝臟纖維化程度較4周組嚴重,有假小葉形成;免疫組化顯示肝纖維化4周、8周組大鼠肝組

3、織中ZEB1和ZEB2主要表達在肝細胞的胞漿中,表達量均較相應(yīng)正常對照組顯著增加(P<0.01),且肝纖維化8周組大鼠肝臟ZEB1和ZEB2表達量較肝纖維化4周組有顯著增加(P<0.01);肝纖維化4周、8周組大鼠肝組織中a-SMA主要表達在纖維間隔和鄰近的肝細胞胞漿中,表達量較相應(yīng)正常對照組顯著增加(P<0.01),且肝纖維化8周組大鼠肝臟a-SMA表達量較肝纖維化4周組也有顯著增加(P<0.01)。RT-PCR檢測結(jié)果顯示肝纖維化4

4、周和8周組大鼠肝組織ZEB1和ZEB2mRNA表達量顯著高于相應(yīng)4周和8周正常對照組(P<0.01),ZEB1和ZEB2mRNA在肝纖維化8周組大鼠肝臟的表達量較肝纖維化4周組略有降低,但二者相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05);同時肝纖維化4周和8周組大鼠肝組織E-cadherin的mRNA表達量顯著低于正常對照組(P<0.05),且肝纖維化8周組大鼠肝臟E-cadherinmRNA的表達量較肝纖維化4周組進一步下降(P<0.05)。

5、r>　　結(jié)論：肝細胞轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2蛋白及基因表達水平在CCl4誘導肝纖維化發(fā)生過程中顯著增加,提示轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2可能參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展;本研究還發(fā)現(xiàn)纖維化大鼠肝臟上皮細胞特征蛋白E-cadherinmRNA表達顯著減少,同時間質(zhì)細胞特征蛋白a-SMA在纖維間隔和部分肝細胞內(nèi)表達顯著增多,提示在大鼠肝纖維化發(fā)生過程中有部分肝細胞發(fā)生了EMT轉(zhuǎn)變;我們認為可能是轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2表達上調(diào)通過抑制其下游靶