甜味蛋白Brazzein在番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁
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1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文甜味蛋白Brazzein在番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化研究姓名：郭淑華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：蔬菜育種學(xué)指導(dǎo)教師：杜永臣王曉武20050601AbstractSweetproteinBra口cinisoneofthenaturalproteinsweetenarsBrazzdnhaslOWcal嘶eandintrinsicsweetness5002000timesov@rsucroseendwillnotcauseweig

2、htgain、toothdecay、andthesugardiabetesthatpeoplesufferedfrequentlywhentakingsugarWeaimedinthepresentstudyatimprovingtomatosweetnesswithoutincreasingthesugarcontentbyintroducingBrazzemgeneintotomatotlmu#transgenictechnique

3、WeclonedafruitspecificexpressionpromotarESPlandconstructedaveetorwhichexpressesasynthesizedBrazzeingeneintomatofruitTransgenicmatctialsⅥre∞obtain。dintwotomatovarietiesZhongshuNo4endLichun1、Developmentofenefficienttomatot

4、ransformationsystem：Weusedl；afdiscandagrobaeterinmmediatedtransformationsystemintomatoThebinary’vectorpBll21Wii8usedaSabasicexpressionvectortomakeconstructsWeselectedpropermediumanddeterminedlOOmgtlkanamycinebeingtheeffe

5、ctiveselectionantibioticconcentrationintransformingtomatoTomatovarieties，MciwciYmgtao，ZhongshuN04endLiChunw啪successfully’transformedwithdifferentconstructsMaintaining100加舭kanamycineinthewholeprocessoftmnsfommtionrodilces

6、ignificantlytheescapesandincreasetheefficiencytodetectpositivemmsfonnentsInthepresentcase，90％ofalltherootedplantswesedetectedpositive2、CloningandfunctionanalysisofafiuitspecificpromoterE8P1WeclonedfromthetomatovarietyHon

7、gmenao213the1121bppromoterE8P1andmadetheGUSexpressingconstructESPl：：GUSTheconstructworesuccessfullytransformedintotomatoPCRtestingofthegenomicDNAandonestepRTPCRverifiedtheintegrationandtheexpressionoftheGUSgeneGUS仃8nscri

8、ptionwasdetectedonlyinthematurefruitsendexpressionwasatahigherlevelthanthatof35S：：GUStransformedplantsinfruitHistochemicaldyingoftheGUSactivityalsoindicatedthatE8PI：：GUStransgenictomatoexpressedGUSspecificallyinmaturefru

9、itThedataprovedthatE8P1couldsoFveasanefficientpromoterforexpressinggenesintomato丘uit3、SynthesizingofBrazzcingeneanditstransformationintomatoWesynthesizedbyPCRa162bpBrazzeingeneusingitscodingsequenceandclonedthePCRfragmen

10、tintoaTvectorWeconstructedtwoplantexpressionvectorspE8P1BandpBll21BforthefruitspecificendconstitutiveexpressionrespectivelyWeconfirmedbyRTPCRthattransgenictomatoesofthetwocons缸u(yù)etsexpressedBrazzeingeneatthetranscriptiona

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