AICAR激活A(yù)MPK對(duì)卵巢癌細(xì)胞株整合素β4及E-鈣粘連蛋白的影響.pdf

1、中文目的：觀察卵巢癌細(xì)胞整合素β4（Integrinβ4）及E-鈣粘連蛋白（E-cadherin）的表達(dá)，同時(shí)觀察單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）的激活對(duì)卵巢癌細(xì)胞整合素β4及E-鈣粘連蛋白表達(dá)的影響。進(jìn)一步為5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷5-一磷酸鹽（AICAR）是否具有成為針對(duì)卵巢癌細(xì)胞AMPK的潛在抗腫瘤藥物，為卵巢腫瘤的治療及預(yù)后提供理論依據(jù)。
　　方法：1、采用卵巢癌細(xì)胞TOV-112D為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图?xì)胞

2、，給予不同細(xì)胞培養(yǎng)密度，蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)空白對(duì)照組中卵巢癌細(xì)胞Integrinβ4及E-cadherin的表達(dá)水平；應(yīng)用免疫熒光探針的方法通過激光共聚焦顯微鏡分別觀察空白對(duì)照組中卵巢癌細(xì)胞Integrinβ4（紅色熒光）及E-cadherin（紅色熒光）蛋白表達(dá)水平。2、給予AICAR刺激后，蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)空白對(duì)照組、條件實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)組中卵巢癌細(xì)胞中 AMPKα1、AMPKα

3、1（T172）、Integrinβ4及E-cadherin的表達(dá)水平；應(yīng)用免疫熒光探針的方法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察條件實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)組中 AICAR對(duì)卵巢癌細(xì)胞的Integrinβ4（綠色熒光）及E-cadherin（紅色熒光）蛋白表達(dá)水平的影響。3、應(yīng)用BCECF AM（pH－熒光探針）（綠色熒光）檢測(cè)在不同細(xì)胞培養(yǎng)密度下卵巢癌細(xì)胞的空白組、條件實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞內(nèi)的酸堿性。
　　結(jié)果：1、Western blot檢測(cè)顯示，

4、空白對(duì)照組中的卵巢癌細(xì)胞具有較高的Integrinβ4表達(dá)及較低的E-cadherin的表達(dá)；細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，在空白對(duì)照組的卵巢癌細(xì)胞中檢測(cè)到較強(qiáng)的Integrinβ4（紅色熒光）及較低的E-cadherin（紅色熒光）表達(dá)；細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，熒光主要集中在胞膜上。2、與空白對(duì)照組相比，在條件實(shí)驗(yàn)組及加入 AICAR的實(shí)驗(yàn)組中 Integrinβ4表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05），而E-cadherin的表達(dá)明顯增加（P<0.05

5、）；在加入 DMSO的條件實(shí)驗(yàn)組中卵巢癌細(xì)胞的Integrinβ4也有明顯的下調(diào)及E-cadherin表達(dá)水平的上調(diào)（P<0.05）;實(shí)驗(yàn)組與條件實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果相比，在加入AICAR的實(shí)驗(yàn)組中卵巢癌細(xì)胞AMPKα1 Thr172位點(diǎn)磷酸化的表達(dá)水平比加入DMSO的條件實(shí)驗(yàn)組的高（P<0.05）；AICAR預(yù)處理后的實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組的細(xì)胞相比較，發(fā)現(xiàn)Integrinβ4綠色熒光明顯降低，而E-cadherin紅色熒光明顯上調(diào)；條件對(duì)照組與

6、空白對(duì)照組比較，卵巢癌細(xì)胞的Integrinβ4（綠色熒光）也有下調(diào)的趨勢(shì)及E-cadherin（紅色熒光）的上調(diào)，但其趨勢(shì)沒有實(shí)驗(yàn)組的趨勢(shì)明顯。3、免疫熒光結(jié)果顯示，通過BCECF AM（pH－熒光探針）檢測(cè)到在空白對(duì)照組、條件實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)組中的低密度卵巢癌細(xì)胞內(nèi)pH值偏堿性（較亮），而高密度的卵巢癌細(xì)胞內(nèi)pH值偏酸性（較淡）；條件實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果都有熒光表達(dá)下調(diào)的趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)組比條件實(shí)驗(yàn)組的下調(diào)趨勢(shì)更明顯。
　　結(jié)論:AIC