鈣黏附素和β-連接素與宮頸上皮內(nèi)瘤變進展的關系研究.pdf

1、宮頸癌是婦女常見的惡性腫瘤，隨著我國開展宮頸癌的篩查，特別是對宮頸癌的癌前病變一宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)的診斷和及時治療，使宮頸癌的總體發(fā)病率有所下降。宮頸上皮內(nèi)瘤變CIN指的是宮頸癌前病變至原位癌的連續(xù)過程，依據(jù)宮頸上皮細胞不典型增生的程度分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級。CIN的自然病程可能有3種結(jié)局，即病變消退、維持不變和病變進展。由于12～50％未經(jīng)治療的重度宮頸癌前病變能進

2、一步發(fā)展成為浸潤癌，目前臨床僅僅根據(jù)形態(tài)學改變無法判定究竟哪種癌前病變可能消退，進展或持續(xù)存在，因此，如果使用某種特異的分子生物學指標能夠輔助判定宮頸癌前病變的轉(zhuǎn)歸，對于臨床采用不同的治療手段將有重要的指導價值。鈣黏附素(E-cadherin，E-cad)和β-連接素(β-catenin，β-cat)是調(diào)節(jié)細胞與細胞之間、細胞與基質(zhì)之間粘附反應的重要媒介，對維持組織結(jié)構(gòu)形態(tài)起重要作用。研究已顯示，E-cadherin和β-catenin

3、蛋白表達在多種上皮性惡性腫瘤中下調(diào)或缺失，與腫瘤的發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移等密切相關，也與宮頸癌的分化的浸潤關系密切。關于E-cadherin和β-catenin與CIN進展間的關系，雖然有研究顯示E-cadherin和β-catenin在CIN各級中表達下降，認為其與CIN進展有關，但其在CIN各級中的表達情況還有待在臨床中進一步的明確，為最終明確其在CIN進展中的作用提供依據(jù)。本課題應用免疫組化方法，觀察E-cadherin和β-caten

4、in在CIN各級表達情況，了解E-cadherin和β-catenin與CIN進展間的關系，為臨床判斷CIN的潛在惡性程度提供指標。研究目的觀察鈣黏附素(E-cad)和β-連接素(β-cat)在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達，探討其與宮頸上皮內(nèi)瘤變進展的關系。 材料與方法 1．研究對象 選取深圳市第五人民醫(yī)院2005年12月～2006年12月經(jīng)電子陰道鏡檢查，宮頸活檢組織標本51例。所有病例13種高危人乳頭瘤病毒HP

5、V檢測(第二代雜交捕獲法，Hybrid Capture Ⅱ)陽性，年齡28～49歲，中位年齡34歲。其中柱狀上皮移位(columnar ectopy)10例、CINⅠ級9例、CIN Ⅱ級18例、CIN Ⅲ級14例。所有病例術前均未實行放化療或?qū)m頸物理治療，資料完整，且經(jīng)病理證實。全部標本經(jīng)10％福爾馬林固定，石蠟包埋。 2．檢測試劑 E-Cadherin (4A2C7)、Catenin (CAT-5H10) 單克隆抗體(

6、即用型)，通用型SP試劑盒(即用型)、DAB試劑盒均購自北京中杉金橋公司，采用微波抗原修復 (pH8.0枸櫞緩沖液)。 3．實驗方法 臨床收集宮頸活檢組織標本，應用免疫組織化學方法檢測E-Cadherin和β -atenin蛋白的表達。采用S-P法染色，切片常規(guī)脫蠟水化后，加入過氧化物酶阻斷溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，抗原修復后加入第一抗體，4℃冰箱過夜后，加入生物素標記的第二抗體，室溫下孵育后再加入鏈霉素抗

7、生物素蛋白-過氧化物酶溶液，DAB顯色，蘇木素復染，脫水、透明、封片。用PBS代替一抗作陰性對照；分別用已知陽性的結(jié)腸癌組織切片作陽性對照。 4．結(jié)果的判定采用免疫組織化學S-P法，用結(jié)腸黏膜組織切片作為陽性對照，PBS液代替一抗作為陰性對照，DAB顯色。光鏡下觀察并攝片，陽性標準為細胞膜上、細胞質(zhì)或細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒。 正常表達為膜表達，在膜上或膜質(zhì)同時表達，且陽性細胞面積大于觀察面積的80％為正常表達。異位表達包括

8、胞質(zhì)型、異質(zhì)型，異常表達有胞質(zhì)型、異質(zhì)型表達及表達缺失。 陽性信號采用圖像分析儀進行定量分析。每張切片在光鏡下取5個高倍視野，輸入計算機，經(jīng)病理圖文分析系統(tǒng)測量其平均光密度值(A)，通過平均光密度的數(shù)值來比較其表達強度的高低。 5．統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件處理，實驗數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布者采用均數(shù)±標準差(x±s)表示，進行方差齊性檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用最小顯著差異法(LSD，

9、Least-significant Differel3ce)檢驗，非正態(tài)數(shù)據(jù)兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗，采用Pearson直線相關進行相關分析，取P<0.05為檢驗標準。 實驗結(jié)果 1．E-cadherin在柱狀上皮移位組及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達E-cadherin在柱狀上皮移位組織、各級宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織中的陽性表達率分別為80％、66.7％和55.6％、42.9％，即從柱狀上皮移位→CIN Ⅰ級→

10、CIN Ⅱ級-CINⅢ級，E-cadherin的表達陽性率呈遞減趨勢，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 E-cadherin在柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組中的平均光密度值(A)分別為：0.0866±0.0392、0.073±0.0122、0.0467±0.0056、0.0396±0.0097。E-cadherin的表達在柱狀上皮移位組、不同級別宮頸CIN組織中的平均光密度值差異有統(tǒng)計學意義(P值<0.05

11、)，組間比較柱狀上皮移位組高于CINⅡ～Ⅲ級組； CIN Ⅰ級組高于CIN Ⅱ～Ⅲ級組，差異均有顯著性意義(P值均<0.05)；柱狀上皮移位組與CIN Ⅰ級組差異不顯著；CIN Ⅱ級組與CINⅢ級組差異不顯著(P值均>0.05)。 2．β-catenin在柱狀上皮移位組織及宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達β-catenin在柱狀上皮移位組織、CIN各級組織中的陽性表達率分別為90％、77.8％和61.1％、50.0％，即從柱狀上皮移位

12、→CIN Ⅰ級→CIN Ⅱ級→CINⅢ級，E-cad的表達陽性率呈遞減趨勢，其差異有顯著性(P<0.05)。 β-catenin在柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組中的平均光密度值(A)分別為：0.1101±0.0116、0.1016±0.0108、0.0711±0.0062、0.0515±0.0091。β-catenin的表達在柱狀上皮移位組、不同級別宮頸CIN組織中的平均光密度值(A)差異有統(tǒng)計學意義(

13、P值<0.05)，組間比較柱狀上皮移位組高于CIN Ⅱ～Ⅲ級組； CIN Ⅰ級組高于CIN Ⅱ～Ⅲ級組，差異均有顯著性意義(P值均<0.05)；柱狀上皮移位組與CIN Ⅰ級組差異不顯著；CIN Ⅱ級組與CINⅢ級組差異不顯著(P值均>0.05)。 3、鈣黏附素和β-連接素在宮頸組織中表達的相關性柱狀上皮移位組、CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CINⅢ級中，鈣黏附素和β-連接素的表達均呈下降趨勢，二者的平均光密度值(A)正相關(r=2

14、.546，P=0.018<0.05)。鈣黏附素及β-連接素在宮頸組織中表達的有相關性。 結(jié)論 1、從柱狀上皮移位→宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級→宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級→宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級這一過程中，鈣黏附素的表達逐漸下降，鈣黏附素表達下調(diào)與宮頸癌前病變進展相關。 2、β-連接素在柱狀上皮移位→宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級→宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級→宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級中的表達呈遞減趨勢，其表達下調(diào)與宮頸癌前病變進展相關。 3、鈣黏附素、