HIF-1α在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變的表達(dá)及意義.pdf

1、宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性患者的健康和生命。其發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位，僅次于乳腺癌。近年來其發(fā)病率呈明顯上升并且有年輕化趨勢，隨著陰道鏡等篩查方法的普及，使宮頸癌易于早期診斷，早期治療，而且手術(shù)、放療、化療等治療方法的改進(jìn)與提高使宮頸癌的死亡率大為下降。盡管如此，子宮頸癌患者總的生存率僅維持在40％左右。新近研究表明，缺氧是腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移的始動(dòng)因素。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-induciblef

2、actor 1，HIF-1α)是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子，其活性對維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝、心血管生成、促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移起著重要作用。宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)緩慢的過程，一般宮頸癌前病變發(fā)展成宮頸癌，大約需要十年甚至更長時(shí)間。因此我們從分子水平探討宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，希望能為阻斷其向惡性發(fā)展并為其治療提供新的方向。雖然HIF-1α在宮頸癌中的表達(dá)近期已有報(bào)道，但在宮頸液基細(xì)胞中的表達(dá)和二者的相關(guān)性的研究國內(nèi)外報(bào)道較少

3、。本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)，免疫印跡，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的方法檢測HIF-1α在宮頸組織和宮頸液基細(xì)胞中的表達(dá)情況，判斷HIF-1α在宮頸癌中的表達(dá)特征，為揭示宮頸癌發(fā)生機(jī)理、進(jìn)一步了解其生物學(xué)行為、判斷預(yù)后、選擇合理的治療方案提供幫助。 方法： 1、免疫組織化學(xué)方法采用過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素進(jìn)行組織染色(S-P法)。結(jié)果判定：HIF-1α的陽性信號位于細(xì)胞核和(或)細(xì)胞漿，被染成淺黃色、棕黃色或黃褐色顆粒。HIF-1α

4、表達(dá)以細(xì)胞染色強(qiáng)度和細(xì)胞陽性百分率得分之和進(jìn)行判定。隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(400×)進(jìn)行判斷：無染色計(jì)0分；弱染色(淺黃色)計(jì)1分；中等染色(棕黃色)計(jì)2分；強(qiáng)染色(黃褐色)計(jì)3分。細(xì)胞陽性率≤5％計(jì)0分，5％～25％計(jì)1分，25％～50％計(jì)2分，>50％計(jì)3分。上述二項(xiàng)相加，0分為陰性(-)，1-2分為(1+)，3～4分為(2+)，5～6分為(3+)。 2、Western blot取新鮮樣品加5倍裂解緩沖夜，剪碎、勻漿超聲處

5、理，高速低溫離心提取上清蛋白，電泳，轉(zhuǎn)印，經(jīng)封閉后加相應(yīng)的一抗、二抗及顯色試劑檢測。結(jié)果判定為轉(zhuǎn)印膜上出現(xiàn)棕色蛋白條帶，并測定蛋白條帶的灰度值。 3、RT-PCR設(shè)計(jì)引物，提取RNA，測OD值，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物電泳。結(jié)果判定為瓊脂糖凝膠上出現(xiàn)亮帶并測定灰度值。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用卡方檢驗(yàn)分析HIF-1α表達(dá)與臨床病理因素關(guān)系及在不同宮頸病變中的意義。采用t檢驗(yàn)