探討神經(jīng)標(biāo)志物在先天性巨結(jié)腸癥腸壁的表達(dá)及意義.pdf

1、目的： 本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)(免疫組化)方法，觀察先天性巨結(jié)腸癥(Hirschsprung's disease，HD)患者擴(kuò)張段(有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段，NG)和痙攣段(無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段，AG)以及非先天性巨結(jié)腸癥病人(對(duì)照組)腸壁神經(jīng)組織中BCL-2(B-lymphoma/leukemia-2)蛋白、神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(neural cell adhesion molecule，NCAM)、神經(jīng)細(xì)胞特異性烯醇化酶(Neuron spec

2、ific enolase，NSE)、S-100蛋白(Soluble protein 100，S-100)的表達(dá)結(jié)果，并采用圖像分析技術(shù)對(duì)腸道神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行定量分析：與蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosine，HE)染色結(jié)果比較，加以分析，以幫助診斷和了解HD的病理生理改變。 方法： 1、收集蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院小兒外科2005-2007年先天性巨結(jié)腸病人腸管標(biāo)本31例，包括HD擴(kuò)張段與痙攣段。以10例年齡與之相符

3、的無HD患兒的手術(shù)切除結(jié)腸標(biāo)本作為對(duì)照組。所有標(biāo)本均經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋保存。 2、分別對(duì)HD擴(kuò)張段、痙攣段、對(duì)照組腸壁組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和HE染色，計(jì)算機(jī)成像系統(tǒng)照相存盤，用圖像分析軟件(Image-Pro-Plus)判定NCAM、S-100在HD擴(kuò)張段與痙攣段單位環(huán)肌層中的陽性染色面積百分比。 結(jié)果： 1、先天性巨結(jié)腸擴(kuò)張段HE和免疫組化染色，顯微鏡觀察見：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞皆存在，肌層神經(jīng)纖維有

4、不同程度的排列改變，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小不等；痙攣段均未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 2、BCL-2在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，神經(jīng)纖維不表達(dá)或弱陽性，而且在未成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中也表達(dá)；NSE和NCAM在腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞細(xì)胞及神經(jīng)纖維中均有表達(dá)；S-100不表達(dá)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 3、定量分析：HD痙攣腸段缺乏神經(jīng)節(jié)細(xì)胞；NCAM、S-100在HD痙攣段與擴(kuò)張段環(huán)肌層表達(dá)的陽性面積率比較有明顯差別(P<0.05)，NCAM和

5、S-100在痙攣段的表達(dá)明顯減少。 結(jié)論： 1、BCL-2免疫組化染色可很好的顯示神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，尤其是未成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，較經(jīng)典的NSE、S-100免疫組化染色好，對(duì)鑒別HD與先天性巨結(jié)腸癥同源病(HAD)有重要意義。 2、NCAM對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維均染色，只表達(dá)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞膜上，可與BCL-2的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞漿染色模式互補(bǔ)，更利于診斷HD。 3、BCL-2在HD病變腸段表達(dá)減少，可能參與HD的發(fā)病機(jī)制。