人工合成E-選擇素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷血腦屏障的影響及機(jī)制探討.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分:人工合成E-選擇素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷血腦屏障通透性的影響
　　目的:使用改良Zea Longa線栓法建立SD(Sprague-Dawley)局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠模型,應(yīng)用人工合成E-選擇素對(duì)大鼠進(jìn)行干預(yù),研究其對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后的血腦屏障通透性、腦梗死及腦水腫體積的影響。
　　方法:將90只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組)、模型組(B組)和人工合成E

2、-選擇素干預(yù)組(C組),每組30只。采用改良ZeaLonga線栓法建立SD大鼠腦缺血再灌注損傷模型。E-選擇素干預(yù)組在建立模型10min前從股靜脈注射E-選擇素(10mg/kg)。所有大鼠在取腦前2 h從股靜脈注射2.5％伊文氏藍(lán)(0.2mg/kg)。在缺血2h再灌注3h、6h、24h、48h、72h5個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、MRI掃描測(cè)定腦梗死及腦水腫的體積比、多功能酶標(biāo)儀測(cè)定腦組織中伊文氏藍(lán)含量等方法了解人工合成E-選擇素對(duì)腦缺

3、血再灌注損傷大鼠血腦屏障通透性的干預(yù)作用。
　　結(jié)果:(1) A組未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺失,B組和C組均有不同程度的神經(jīng)功能缺失,B組與 C組之間部分時(shí)間點(diǎn)(3h、6h、24h)神經(jīng)功能評(píng)分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);(2)A組無腦水腫及梗死, B、C兩組均有不同程度腦水腫及梗死且C組各時(shí)間點(diǎn)MRI測(cè)得腦組織梗死及水腫的體積較B組小,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(3)A組腦組織伊文氏藍(lán)含量各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化,B組和C組兩組變化趨勢(shì)

4、相近,再灌注3h EB含量開始升高,6h繼續(xù)升高,24h達(dá)到峰值,48h有所下降,72h仍高于A組。C組各時(shí)間點(diǎn)伊文氏藍(lán)含量值均低于B組,兩組差異顯著(P<0.05)。
　　結(jié)論:1、大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷可導(dǎo)致血腦屏障的通透性增加;2、人工合成E-選擇素能夠減少大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷導(dǎo)致的腦梗死及腦水腫的體積,減輕血腦屏障破壞導(dǎo)致的通透性增加,具有血腦屏障保護(hù)作用。
　　第二部分:人工合成E-選擇素對(duì)大鼠局灶性腦缺

5、血再灌注損傷組織咬合蛋白(occludin)及閉鎖小帶蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)含量表達(dá)的影響
　　目的:探討人工合成E-選擇素對(duì)大鼠局部腦缺血再灌注損傷腦組織內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接蛋白咬合蛋白(occlud in)及閉鎖小帶蛋白-1(ZO-1)含量表達(dá)及位置結(jié)構(gòu)的影響,從而初步探討人工合成E-選擇素對(duì)血腦屏障保護(hù)的作用機(jī)制。
　　方法:采用改良的Zea Longa線栓法建立SD大鼠局灶性腦缺血再

6、灌注損傷模型,將90只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(A組)、模型組(B組)和人工合成E-選擇素干預(yù)組(C組),每組30只。各組大鼠分別在腦缺血2h再灌注3h、6h、24h、48h、72h5個(gè)時(shí)間點(diǎn)提取腦組織標(biāo)本。采用免疫組化法觀察缺血區(qū)腦組織occludin及ZO-1的位置結(jié)構(gòu)及含量,Western blot法半定量測(cè)定occludin及ZO-1的含量。
　　結(jié)果:免疫組化:(1)A組occlud in及ZO-1陽(yáng)性細(xì)胞均沿血管豐

7、富表達(dá)。(2)B組occ lud in及ZO-1都于缺血再灌注3h陽(yáng)性表達(dá)數(shù)減少,24h陽(yáng)性表達(dá)數(shù)降至最低,72h陽(yáng)性表達(dá)有所增加,但仍低于A組。occlud in表達(dá)的連續(xù)性在24 h達(dá)到最差。(3)C組occ lud in及 ZO-1陽(yáng)性表達(dá)數(shù)在各時(shí)間點(diǎn)均高于B組但低于 A組。Occludin表達(dá)的連續(xù)性在24 h也好于B組,差于A組。
　　Western blot半定量分析結(jié)果:(1)A組occludin及ZO-1蛋白表達(dá)水

8、平無明顯變化。(2)B組occlud in及ZO-1蛋白的變化趨勢(shì)相似,3 h蛋白表達(dá)水平開始減少,6 h繼續(xù)減少,24h達(dá)到最低值,48h有所回升,72h仍低于A組。(3)C組各時(shí)間點(diǎn)occlud in及ZO-1變化趨勢(shì)同B組,但蛋白表達(dá)水平均高于B組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:1.局灶性腦缺血再灌注損傷后大鼠腦組織內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)cclud in及ZO-1表達(dá)減少;2.人工合成E-選擇素血腦屏障的保